[发明专利]酸枣仁安神催眠活性皂苷组分及其分离纯化方法与应用

摘要

本发明公开了酸枣仁安神催眠活性皂苷组分及其分离纯化方法与应用，属于天然产物分离领域。本发明设计了一条新的、不引入具有明显毒性溶剂和试剂的、相对安全的提取路线，其特征在于：采用醇提法、正丁醇萃取法从酸枣仁样品中提取出了酸枣仁安神催眠活性皂苷样品；然后采用柱层析、薄层层析法从皂苷样品中分离出了酸枣仁安神催眠活性皂苷组分I和组分II。从酸枣仁中分离获得的两种酸枣仁皂苷组分具有明显的催眠活性；从中药中提取分离天然安神催眠活性成分可以解决化学合成药物副作用多及成瘾性等问题，将有利于人类的健康，造福于广大社会。

主权项

一种酸枣仁安神催眠活性皂苷组分的分离纯化方法，其特征在于包括以下的步骤：（1）酸枣仁安神催眠活性皂苷样品的制备：酸枣仁经炒制、粉碎后，过40目筛，60℃干燥24h，制备获得酸枣仁粉；将酸枣仁粉按索式提取法用10倍质量的石油醚在60℃～65℃脱脂4h，获得残渣和酸枣仁油；取出残渣，干燥、研碎、过40目筛后获得脱脂酸枣仁粉；将脱脂酸枣仁粉用25倍质量的体积分数为70％的乙醇在85℃～90℃条件下回流提取3h，抽滤获得残渣Ⅰ和醇液；将醇液在60℃下减压蒸干至膏状，加水溶解，并过滤除杂后获得水溶液；向水溶液加1倍体积的水饱和正丁醇萃取，弃水层，获取正丁醇层I；将正丁醇层I用1倍体积的0.1M的KOH溶液碱化处理，获得碱水层和正丁醇层II；将正丁醇层II减压蒸干，即得到粗皂苷；将粗皂苷经过三次溶解‑过滤‑室温干燥，即得到酸枣仁安神催眠活性皂苷样品；（2）酸枣仁安神催眠活性皂苷组分的分离纯化方法：1）柱层析分离纯化将步骤（1）制备的皂苷样品用水配制成浓度为25mg/ml的上样皂苷样液，向装有吸附剂的层析柱中上样10ml，体积份数为60%乙醇溶液作洗脱液40ml，调节蠕动泵转速使流速为0.5ml/min，每10ml一管收集洗脱液；从洗脱液中每管取1ml，加入1ml质量份数为2%香草醛溶液，2ml浓硫酸，经紫外光分光光度计扫描发现在507nm处有最大吸收峰的洗脱液为主峰洗脱液，将主峰洗脱液收集备用；2）薄层层析分离纯化将步骤1）获得的主峰洗脱液组分浓缩到12.5mg/ml，展层剂为正丁醇‑冰乙酸‑水的混合溶液，质量分数为2%的香草醛乙醇溶液做显色剂，在薄层板下端点样30μl，使样点在板上纵向展开；样液在薄层板上展开20cm后，将薄层板上的两个点显色，展距较近的深蓝色显色点和展距较远的蓝绿色显色点的硅胶分别收集起来，分别用体积分数为70%乙醇溶液浸泡24h后，搅拌30min，再用5000r/min离心5分钟，得到无色透明溶液；60℃减压浓缩至原体积的1/5，得到浅黄色透明浓缩液，分别标记为酸枣仁安神催眠活性皂苷组分I和组分II。