[发明专利]一种宫颈癌特异差异表达的候选血浆蛋白标志物的筛选方法

摘要

本发明公开了一种宫颈癌特异差异表达的候选血浆蛋白标志物的筛选方法，包括以下步骤：(1)临床标本收集及组织RNA制备；(2)维吾尔族妇女宫颈癌及癌前病变组织RNA的高密度人类基因表达谱芯片分析：(3)宫颈癌特异性差异表达候选基因的半定量RT-PCR分析。本发明通过半定量PCR筛查鉴定，发现绝大部分候选基因编码的mRNA表达水平在CSCC(或CIN)和NC组织之间存在显著差异，同时证明了基因芯片分析数据的可靠性和灵敏度。

主权项

一种宫颈癌特异差异表达的候选血浆蛋白标志物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)临床标本收集及组织RNA制备维吾尔族妇女宫颈鳞癌、宫颈内上皮瘤变II‑III和正常对照为对象，系统收集患者病例信息和新鲜宫颈组织标本，当场取出标本后，立即液氮冻存与运输，在‑80℃超低温冰箱保存，从以上组织标本中，选取病理确诊的组织标本72例，其中宫颈鳞癌25例，宫颈内上皮瘤变II‑III22例和正常对照25例。所有入选病例术前均未接受放疗或化疗，平均年龄为45.2岁；(2)维吾尔族妇女宫颈癌及癌前病变组织RNA的高密度人类基因表达谱芯片分析21)组织RNA样品的制备从步骤(1)收集的维吾尔族妇女宫颈病变患者组织标本中，选取病理确诊的新鲜宫颈组织共20例，其中宫颈鳞癌7例，宫颈内上皮内瘤变II‑III7例，正常对照组织6例，利用RNA提取试剂盒制备组织RNA，保存于超低温冰箱‑80℃；22)取以上人类基因组表达谱芯片共20张，分别与20例宫颈组织RNA进行杂交实验，并重复三次；23)利用LuxScan10KA双通道激光扫描仪，对杂交后的基因芯片进行扫描分析；24)利用SAM软件，并以NC为对照，对CSCC和CIN II‑III的芯片扫描数据进行处理与统计分析，其聚类分析；25)以两倍异常绝对值差异作为量化比较的界限，获得CSCC或CIN II‑III与NC之间差异表达候选基因；(3)宫颈癌特异性差异表达候选基因的半定量RT‑PCR分析31)候选基因的选择及编码的mRNA特异性引物设计32)候选基因表达水平的半定量RT‑PCR分析。主要是提取组织RNA，合成cDNA，利用特异性引物和半定量RT‑PCR方法对72例组织RNA样品进行mRNA表达水平鉴定，通过定量及统计学差异分析，筛选出具有显著差异的CSCC或CIN II‑III特异性差异表达基因。