[发明专利]一种旋毛虫重组蛋白及应用有效
| 申请号： | 201310184056.2 | 申请日： | 2013-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN103243105B | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 付宝权;盖文燕;李文卉;曲自刚;谢志宙;刘静宜 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/15 | 分类号： | C12N15/15;C12N15/70;C07K14/81 |
| 代理公司： | 兰州振华专利代理有限责任公司 62102 | 代理人： | 张晋 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开一种重组蛋白的制备方法，特别是一种TsSerpin重组蛋白，以及这种蛋白和它的用途。本发明的TsSerpin重组蛋白的制备方法是：以猪旋毛虫肌幼虫中提取总RNA为模板，以Oligo(dT)18 Primer为引物进行反转录；再用上述所得到的反转录cDNA为模板，用SEQ ID №1和SEQ ID №2为引物进行PCR扩增，得到猪旋毛虫TsSerpin基因；再经构建重组质粒、转化大肠杆菌等处理得到目标蛋白。本发明的重组蛋白可用于制备检测旋毛虫病的抗原。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 旋毛虫 重组 蛋白 应用 | ||
【主权项】：
1.TsSerpin基因片段蛋白TsSerpin5制备方法，其特征是：1）从旋毛虫肌幼虫中提取总RNA；2）以Oligo(dT)18 Primer为引物，总RNA为模板进行反转录；3）用上述2）所得到的反转录cDNA为模板，用SEQ ID №1和SEQ ID №2为引物进行PCR扩增，得到旋毛虫TsSerpin基因；4）将所得到的旋毛虫TsSerpin基因与pMD18‑T克隆载体连接，构建pMD18‑TsSerpin重组质粒；5）测序正确的重组质粒经过EcoR I 和XhoI进行双酶切，酶切产物进行纯化后与载体pET30a连接，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，构建原核表达重组质粒pET30a‑TsSerpin；6）将旋毛虫pET30a‑TsSerpin重组质粒进行诱导表达；7）对经诱导表达的旋毛虫TsSerpin重组蛋白进行纯化处理得到TsSerpin重组蛋白；8）以TsSerpin重组质粒pET30a‑TsSerpin为模板、以SEQ ID No.3和SEQ ID No.2为引物进行扩增PCR得到目标蛋白TsSerpin5。
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