[发明专利]一种高效快速繁殖铁皮石斛组培苗的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种高效快速繁殖铁皮石斛组培苗的方法。具体包括：将各个阶段的激素浓度调整为最适浓度，然后将铁皮石斛种子在种子培养基中培养形成原球茎并进一步形成小芽，接着把铁皮石斛小芽转接于继代培养基中培养成具有2～3片真叶并带有1～2条幼根的小苗，再小苗转移到一步成苗培养基中培养成具有2～3条根、4片叶片、株高≥2.5cm、茎粗≥0.2cm的商品组培苗，最后将商品组培苗移栽至大棚内苗床上的基质中并培养至可采收。通过实施本发明，种子萌发时间短及萌发率高，芽苗生产快、污染低、变异少，商品组培苗粗壮、叶面展开、根系发达；从而实现铁皮石斛种苗快速无毒繁育的目的。

主权项

一种高效快速繁殖铁皮石斛组培苗的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)将铁皮石斛蒴果顶部用刀片切割一小部分，用清水清洗一遍表面，放置于组培瓶中，然后在无菌操作台中用酒精浸泡30s，接着用氯化汞水溶液浸泡10min，再用无菌水反复漂洗3～5次，即可完成消毒步骤；(2)将步骤(1)得到铁皮石斛种子在无菌环境中将其放置于无菌的铝片上，用手术刀切开，将其播种于种子培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度1000Lux‑1500Lux、光照时间为8h/d的培养室中培养，培养2个月后种子萌发形成原球茎并进一步形成小芽；其中，上述的种子培养基组成为：+6‑卡基嘌呤0.2mg/L～0.25mg/L+萘乙酸0.05mg/L～0.1mg/L+白糖20g/L+土豆200g/L+琼脂5.1g/L；(3)将步骤(2)得到的铁皮石斛小芽转接于继代培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度3000Lux‑3500Lux、光照时间为11h/d的培养室中培养，3个月后小芽变成具有2～3片真叶并带有1～2条幼根的小苗；其中，上述中继代培养基组成为：N6+6‑卡基嘌呤2mg/L～2.5mg/L+萘乙酸0.5mg/L～1mg/L+白糖20g/L+土豆200g/L+琼脂5.1g/L；(4)将步骤(3)中得到的小苗转移到一步成苗培养基中，在25±3℃、湿度≤60％、光照强度3000Lux‑3500Lux、光照时间为12h/d的培养室中培养，4个月后小苗变成具有2～3条根、4片叶片、株高≥2.5cm、茎粗≥0.2cm的商品组培苗；其中，上述中一步成苗培养基组成为：改良的N6+6‑卡基嘌呤0.5mg/L～1mg/L+萘乙酸1mg/L～1.5mg/L+白糖20g/L+土豆200g/L+琼脂5.1g/L；(5)将步骤(4)得到的生根苗从组培瓶内取出用清水清洗取出培养基后，用高锰酸钾泡根5min后，摊开晾干至根部发白，然后移栽至大棚内苗床上的基质中，培养20～24个月后即可采收。