[发明专利]一种超双元载体、构建方法及其应用

摘要

本发明涉及一种超双元载体、构建方法及其应用。本发明超双元载体，骨架载体为pCMBIA1301-hpt-，将Xba I-RB-LB-Sal I插入在骨架载体的限制性酶切位点Xba I和Sal I间，这样，连同原有的左右边界序列，形成了2个T-DNA区；再通过限制性酶切位点将hpt II连入T-DNA2区中，获得了含有hpt II的超双元载体pDT1301。本发明pDT1301含有hpt II，便于转化过程中抗性愈伤和转基因再生植株的筛选；而hpt II与外源目的基因不在同一个T-DNA区内，又便于转基因后代自交分离，获得不含有选择性标记基因的安全转基因植株，为转基因植物的安全释放扫清障碍。

主权项

超双元载体pDT1301，其骨架载体为去除潮霉素抗性基因的pCMBIA1301载体，即pCMBIA1301‑hpt‑，具有一个T‑DNA区，其特征在于：在该骨架载体T‑DNA区的多克隆位点处插入序列片段，使原来T‑DNA区从左边界到右边界依次被分成T‑DNA1区和T‑DNA2区，所述序列片段的5’端为右边界序列RB，3’端为左边界序列LB，中间相连的为无关序列；所述T‑DNA2中通过限制性酶切位点插入含有潮霉素抗性基因hpt II的片段，所述RB序列如SEQ ID NO13所示，所述LB序列如SEQ ID NO14所示。