[发明专利]一种人子宫肌瘤14-3-3 γ高表达载体的构建方法及应用有效
| 申请号： | 201310186583.7 | 申请日： | 2013-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN103555750A | 公开（公告）日： | 2014-02-05 |
| 发明（设计）人： | 朱雪琼;沈奇;姜文晓 | 申请（专利权）人： | 温州医学院附属第二医院 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66 |
| 代理公司： | 温州瓯越专利代理有限公司 33211 | 代理人： | 李友福 |
| 地址： | 325000 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人子宫肌瘤14-3-3γ高表达载体的构建及应用，其步骤是：首先是目的基因的扩增与纯化，设计上引物和下引物，提取子宫肌瘤RNA，逆转录后为模板进行PCR扩增，将目的条带切下后，用试剂盒回收纯化；其次是重组质粒14-3-3γ-pCMV-N-Flag构建与鉴定，将纯化的PCR产物和载体pCMV-N-Flag用BamHI和EcoRI双酶切后，分别用试剂盒回收纯化酶切产物，连接片段，筛选培养，克隆，鉴定，测序，WesternBlot检测蛋白表达，CCK-8检测细胞增殖变化，AnnexinV-FITC/PI双染色法经流式细胞术检测细胞凋亡。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 人子 肌瘤 14 表达 载体 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种人子宫肌瘤14‑3‑3 γ高表达载体的构建方法，其特征在于：选用pCMV‑N‑Flag为中间载体，设计一对引物，在引物中引入BamH I和EcoR I酶切位，以含有目的基因的RNA逆转录后为模板进行PCR扩增，将目的条带切下后，用试剂盒回收纯化，将纯化后的PCR产物和载体pCMV‑N‑Flag用BamH I和EcoR I双酶切后，用试剂盒回收纯化酶切产物，再经连接片段、筛选培养、克隆，即可得人子宫肌瘤表达载体。
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