[发明专利]一种合成短单链脱氧核糖核苷酸探针的方法有效
| 申请号： | 201310189835.1 | 申请日： | 2013-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN103276074A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 彭长庚;温婷 | 申请（专利权）人： | 昆山彭济凯丰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 南京纵横知识产权代理有限公司 32224 | 代理人： | 董建林 |
| 地址： | 215300 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于DNA生物合成领域，具体涉及一种合成短单链脱氧核糖核苷酸探针方法及其应用，可用于检测小的非编码核糖核酸，如微核糖核酸,包括如下步骤：（1）制备重组有模板DNA的质粒；（2）切割并连接模板DNA，从重组质粒上酶切获得模板DNA，使模板DNA首尾连接成环；（3）切单链，滚环复制，用切口酶切断模板DNA的一条链，加入聚合酶以环状带切口的DNA为模板进行滚环复制，扩增出含颈环-探针结构的DNA单链；（4）目的短单链DNA的制备，对步骤（3）的产物采用Ⅱ型内切酶切割形成目的单链DNA探针和副产物DNA，通过PAGE分离纯化得到无突变的单链DNA探针。本发明在小非编码RNA检测领域和小非编码RNA相关疾病的诊断和治疗领域具有广泛用途。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 合成 短单链 脱氧 核糖 核苷酸 探针 方法 | ||
【主权项】：
一种合成短单链脱氧核糖核苷酸探针的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）制备重组有模板DNA的质粒设计模板DNA序列：模板DNA为双链，两端含有相同的酶切位点；模板DNA设有至少一个颈环‑探针结构；模板DNA还带有切口酶位点。合成所述的模板DNA并连接至质粒中，经测序验证无突变并扩增；（2）酶切并连接模板DNA从重组质粒上酶切获得模板DNA，使模板DNA首尾连接成环；（3）切单链，滚环复制用切口酶切断模板DNA的一条链，加入DNA聚合酶以环状带切口的DNA为模板进行滚环复制，扩增出含颈环‑探针结构的DNA单链；（4）目的短单链DNA的制备对步骤（3）的自发形成颈环二级结构的DNA单链产物采用内切酶切割形成与微RNA完全互补的目的单链DNA探针和副产物DNA，通过PAGE分离纯化得到含单一序列的无突变的单链DNA探针。
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