[发明专利]枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶(ansZ)在大肠杆菌中的高效表达无效
| 申请号： | 201310196209.5 | 申请日： | 2013-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN103243063A | 公开（公告）日： | 2013-08-14 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;贾明媚;徐美娟 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N9/82;C12R1/19;C12R1/125 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 以B.subtilis6-7基因组DNA为模板，扩增得到编码L-天冬酰胺酶的基因ansZ，将其克隆到表达载体pGEX-6P-1上，首次实现枯草芽孢杆菌ansZ在E.coli BL21中高效表达，酶活测定表明重组菌酶活较原始菌提高了266倍。用GST融合蛋白亲和层析法纯化L-天冬酰胺酶。对该酶的酶学性质进行了初步研究，该酶的反应最适pH为7.5，在pH值6.0-9.0的范围内稳定，反应最适温度为40℃，在60℃处理2h后仍有10％的剩余酶活，没有发现对该酶有明显激活作用的金属离子，酶动力学参数以L-天冬酰胺为底物的Km值为0.43mmol/L，Vmax为77.51μmol/(mL/min)。 | ||
| 搜索关键词： | 枯草 芽孢 杆菌 天冬 酰胺酶 ansz 大肠杆菌 中的 高效 表达 | ||
【主权项】：
高产L‑天冬酰胺酶重组菌E.coli BL21(DE3)/pGEX‑6P‑1‑ansZ的构建，其特征是以B.subtilis6‑7基因组DNA为模板，扩增得到编码L‑天冬酰胺酶的基因ansZ，将其克隆到表达载体pGEX‑6P‑1上并转化E.coli BL21(DE3)，实现B.subtilis6‑7L‑天冬酰胺酶基因在E.coli BL21(DE3)中高效表达，重组菌E.coli BL21(DE3)/pGEX‑6P‑1‑ansZ的酶活达到10.41U/mL，较出发菌株酶活提高了266倍。
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