[发明专利]一种从牛跟腱中提取胶原的方法

摘要

本发明公开了一种从牛跟腱中提取胶原的方法，该方法首先将牛跟腱冷冻后切块，再次冷冻后粉碎并装填在可控温层析柱内，向可控温层析柱内连续注入提取液，层析柱夹套内循环水的温度与连续注入的提取液温度一致，从层析柱出口收集提取液。酶解后进行层析分离，层析方式为亲和层析，亲和层析介质的配基一种多肽。淋洗出未结合的蛋白质，洗脱出可以与层析介质结合的蛋白即为高纯胶原。该方法具有操作简单，制备出的胶原纯度高和随机降解率低等优点。

主权项

一种从牛跟腱中提取胶原的方法，其特征在于提取方法包括以下步骤：（1）称重：称取新鲜牛跟腱，水洗法去除附属物。（2）冷冻：在‑40℃条件下冷冻保存12～24小时。（3）切块：将冷冻的牛跟腱切成块状（0.5cm×0.5cm）。（4）粉碎：将切成块状的牛跟腱在‑40℃条件下冷冻6‑12小时后置于粉碎机内粉碎。（5）提取：将粉碎后的牛跟腱置于可控温的空层析柱内，其底部筛网的孔径为100～300目，连续将温度为38‑45℃的去离子水从层析柱顶部注入到层析柱中，控制层析柱夹套的循环水温度与向层析柱内注入水的温度一致；收集从层析柱底部流出的溶液，为胶原粗提液。（6）酶解：向胶原粗提液中加入蛋白酶，蛋白与酶的比例控制在50:1到200:1，在一定温度下搅拌24～36小时。（7）精制：将酶解后的溶液过上样至亲和层析柱，层析介质的配基为一种多肽，其氨基酸序列为ICTTNEGVMYRIGDEWDKEHDMGHMMRCTCVGNGRGEWTC VAYSELRD，上样量为层析介质体积的5%～16%。使用水溶液将未吸附的蛋白或多肽淋洗出，采用10%～30%的乙腈‑水溶液将吸附在层析介质上的蛋白洗脱出，收集洗脱液。（8）冻干：将亲和层析法精制的胶原冷冻干燥，获得高纯胶原。