[发明专利]草莓双向电泳差异蛋白质图谱的获取方法

摘要

本发明公开了一种草莓双向电泳差异蛋白质图谱的获取方法，包括以下步骤：1）蛋白质的提取；2）第一向IPG等电聚焦电泳；3）胶条的平衡；4）胶条的转移及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；5）凝胶扫描和图像分析。发明人在发明过程中考虑到草莓叶片富含多糖多酚类物质的特性，利用丙酮对草莓叶片蛋白进行多次沉淀抽提，改进了裂解液配方，提高了离心速率和粗蛋白沉淀的清洗次数和裂解液中尿素的浓度，从而建立了一套适合草莓叶片的差异双向电泳蛋白质组学方法，从而获得了高质量的草莓蛋白质差异图谱。运用本发明的方法能获得蛋白质点清晰、数目较多、分布均匀、背景清楚的草莓叶片蛋白质的双向电泳凝胶图谱。

主权项

草莓双向电泳差异蛋白质图谱的获取方法，其特征是包括以下步骤：1)、蛋白质的提取，包括以下步骤：①、取1g草莓叶片加入液氮，研磨后悬浮于14～16ml的三氯乙酸‑丙酮溶液中，于‑18～‑22℃沉淀10～14小时；所述三氯乙酸‑丙酮溶液中三氯乙酸的体积浓度为10％；②、将步骤①的所得物离心，弃上清；③、步骤②所得沉淀悬浮于14～16ml的B‑巯基乙醇冷丙酮溶液；离心，将所得的沉淀重复上述悬浮和离心2～5次；所述B‑巯基乙醇冷丙酮溶液的制备方法为：将冷丙酮与B‑巯基乙醇按照1：0.07％的体积比进行混合；所述冷丙酮为温度为3～5℃的丙酮；④、将步骤③所得的沉淀干燥处理，得到粗蛋白干粉；加入0.9～1.1ml裂解液A以溶解上述粗蛋白干粉，离心，所得上清为蛋白提取液；所述裂解液A为在每ml水中加入420mg尿素、150mg硫脲、40mg 3‑[3‑(胆酰氨丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、7.2mg二硫苏糖醇、12μL载体两性电解质和5μL苯甲基磺酰氟混合后而得；2)、第一向IPG等电聚焦电泳：将50μL步骤1)所得的蛋白提取液和250μL IPG buffer混匀配成水化溶液，装入17cm等电聚焦槽中；取17cm的pH3‑10的等电聚焦胶条一根放入等电聚焦槽中，从而使等电聚焦胶条在水化溶液中均匀浸湿；再滴矿物油至等电聚焦槽的槽深1/2处，从而盖住整个等电聚焦胶条，盖上等电聚焦槽的槽盖后进行等电聚焦；等电聚焦操作按照仪器使用说明书进行；IEF设定参数如下：上述IPG buffer的制备方法为：在每ml水中加入480mg尿素、20mg 3‑[3‑(胆酰氨丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、7.5mg二硫苏糖醇和12μL载体两性电解质混合后而得；3)、胶条的平衡；4)、胶条的转移及SDS‑聚丙烯酰胺凝胶电泳；5)、凝胶扫描和图像分析。