[发明专利]一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法有效
| 申请号： | 201310208383.7 | 申请日： | 2013-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN103243078A | 公开（公告）日： | 2013-08-14 |
| 发明（设计）人： | 黄和;张洋;江凌;胡燚;李晓彤;张红漫 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/20 | 分类号： | C12N9/20;C12R1/125 |
| 代理公司： | 江苏致邦律师事务所 32230 | 代理人： | 徐蓓 |
| 地址： | 211816 江苏省南京市浦口区浦珠*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于酶工程技术领域，涉及一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法。本发明以枯草芽孢杆菌脂肪A为研究对象，首先筛选突变热点区域；再确定位于蛋白质表面且柔性较大区域的氨基酸位点；结合上述两步理性分析，筛选得到的氨基酸位点突变成天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸四种氨基酸残基的任意一种，并以该氨基酸为中心，在4Å范围内寻找上述4种氨基酸中带相反电荷的氨基酸残基，从而确定突变位点及突变残基；基于对酶结构与功能关系的认知，再解析离子键引入对稳定枯草芽孢杆菌脂肪脂肪酶A蛋白结构的作用机制；最终，通过枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变株的热稳定性实验，验证热稳定性改造的热点残基。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 提高 枯草 芽孢 杆菌 脂肪酶 热稳定性 方法 | ||
【主权项】：
一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶A热稳定性的方法，其特征在于包括如下步骤：1)预测枯草芽孢杆菌脂肪酶A氨基酸突变的热点区域；2)确定位于蛋白质表面且柔性较大区域的氨基酸位点；3)结合步骤1)与2)分析确定与热稳定性相关的氨基酸突变位点；4)基于对酶结构与功能关系的认知，采用分子模拟技术解析离子键引入对稳定枯草芽孢杆菌脂肪脂肪酶A蛋白结构的作用机制；5)构建枯草芽孢杆菌脂肪酶A突变株，并验证突变株的热稳定性，得到热稳定性提高后的枯草芽孢杆菌脂肪酶A。
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