[发明专利]一种可防治猪支原体肺炎的干细胞制剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种可防治猪支原体肺炎的干细胞制剂的制备方法，从初生猪腿骨骨髓中分离猪骨髓间充质干细胞；分离猪骨髓间充质干细胞的亚型细胞BMSC-S3细胞系；建立稳定转染PBD-1基因的BMSC-S3/PBD-1细胞系；PCR检测BMSC-S3/PBD-1细胞表达的基因；细胞免疫荧光化学分析和流式细胞术检测BMSC-S3/PBD-1细胞表达的抗原分子。本发明制备的BMSC-S3/PBD-1细胞稳定表达PBD-1，且具备标准BMSC干细胞特性，将稳定转染PBD-1基因的BMSC-S3/PBD-1细胞通过耳部静脉输注到患支原体肺炎的猪体内，有效剂量为1～5×105/次/kg体重，可以控制猪支原体肺炎疾病；BMSC-S3/PBD-1细胞可以长期在液氮罐中保存，来源有保障，本发明提供的干细胞制剂无耐药性，外源蛋白为猪体特有，无药物残留的风险，应用前景广阔。

主权项

一种可防治猪支原体肺炎的干细胞制剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：从初生猪腿骨骨髓中分离猪骨髓间充质干细胞；分离猪骨髓间充质干细胞的亚型细胞BMSC‑S3细胞系；建立稳定转染PBD‑1基因的BMSC‑S3/PBD‑1细胞系；PCR检测BMSC‑S3/PBD‑1细胞表达的基因；细胞免疫荧光化学分析和流式检测BMSC‑S3/PBD‑1细胞表达的抗原分子；在被诱导条件下，细胞可向成脂细胞或成肌细胞分化；收集经过检测合格的BMSC‑S3/PBD‑1细胞，以磷酸缓冲液或生理盐水进行稀释，通过耳部静脉输注到患支原体肺炎的猪体内，有效剂量为1～5×105/次/kg体重。