[发明专利]一种利用组织培养技术繁殖平贝母的方法

摘要

本发明公开了一种利用组织培养技术繁殖平贝母的方法，主要包括外植体的选择与消毒、材料处理、初代培养、继代培养、小鳞茎的增殖、生根培养和炼苗移栽等步骤。在不同的培养阶段的利用不同的激素进行调节，对培养基配方的精确筛选达到试管苗生长旺盛的优良效果，并且结合有效的灭菌技术，达到提高增殖率和减少变异的目的。并且在继代培养后的小鳞茎的增殖过程中适当更换了培养基，更有利于小鳞茎的快速生长。并且通过鳞片不同部位的比较发现，鳞片繁殖材料最佳选择为内层鳞片的下部。

主权项

一种利用组织培养技术繁殖平贝母的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）外植体的选择与消毒：首先选择当年生长健壮、无霉烂斑点的新鲜平贝母，剪去根及有伤鳞片，流水冲洗30 min后放入清水中浸泡15min，再用50％多菌灵500倍液浸泡20~30 min或者用50％福美双粉500倍液浸泡10~15min，然后将种球鳞片剥下，用紫外灯照射10 min，转入超净工作台，再用75%酒精消毒50 s，无菌水冲洗2~3次，再用6%次氯酸钠溶液消毒10 min，无菌水冲洗2~3次，最后用0.2%的升汞溶液消毒10 min，无菌水冲洗4~5 次；（2）材料处理：首先在超净工作台上，在无菌条件下， 切去鳞片上部1/3，然后将中、下部分割开来，将鳞片和鳞茎基部分别切成6‑8mm的小块；（3）初代培养：在无菌的条件下将步骤（2）得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在在3/4MS常规培养基中添加了0.8mg/L的6‑BA、1.2mg/L的NAA，30‑40mg/L的蔗糖和0.4‑0.8mg/L的ZT；培养温度为24℃，光照时间12 h/d，光照强度2 000 Lx，PH为 6.5，琼脂5 g/L，经过25‑30天形成愈伤组织；（4）继代培养：将初代培养的愈伤组织切下接种在继代培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了0.5mg/L的6‑BA、0.3mg/L的IBA、0.3mg/L的KT和20mg/L的蔗糖，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，PH 6.5，经过7‑12天时间分化出绿点后，即开始下一阶段；（5）小鳞茎的增殖：将分化出绿点的愈伤组织继续培养，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了40mg/L的蔗糖、0.3mg/L的KT、0.4mg/LNAA和0.2mg/L的ZT，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，PH 6.5，经10‑15天培养便可分化出丛生小鳞茎；（6）生根培养：将分化出来的小鳞茎接种于下列诱导培养基中进行生根诱导：1/2 MS培养基、0.3mg/L的KT、1mg/L的活性炭、7‑8g/L的琼脂、0.5mg/L 的NAA，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2200lux，经过8‑12天待小鳞茎长至2.5cm高，根系比较发达时，即开始下一个阶段；（7）炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗6d，然后将长出新根的小鳞茎从培养瓶中取出，在阳光下晒1‑2天，在晒的过程中要适当遮光，使光照强度为自然光的60%，温度在18℃左右，当培养基表面成龟裂状后，取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的腐殖土∶草炭∶珍珠岩：蛭石=2∶2∶1：3 （重量比）的混合基质中，温度控制在15℃左右。