[发明专利]一种利用蓝藻生产咖啡酸的方法

摘要

本发明涉及一种利用蓝藻生产咖啡酸的方法，步骤如下：（1）将相关基因片段插入质粒pBluescript II SK+内，制得重组空白质粒；（2）将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所述的基因片段插入步骤（1）制得的重组空白质粒的EcoRI-PstI内切酶酶切位点之间，制得重组质粒；（3）将重组质粒转化集胞藻Synechocystis sp.PCC6803，制得转基因集胞藻；（4）将步骤（3）制得的转基因集胞藻扩大培养后，经提取，制得咖啡酸。本发明通过构建转集胞藻PCC6803同源重组载体，转化集胞藻获得了在添加前体物质对香豆酸的条件下能够生产咖啡酸的藻株，为咖啡酸的生产提供了新的途径。

主权项

一种利用蓝藻生产咖啡酸的方法，其特征在于，步骤如下：（1）将核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的上臂基因插入质粒pBluescript II SK+的KpnI‑XhoI内切酶酶切位点之间，将核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示的下臂基因插入质粒pBluescript II SK+的SpeI‑SacII内切酶酶切位点之间，将核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示的卡纳抗性片段插入质粒pBluescript II SK+的BamHI‑PstI内切酶酶切位点之间，将核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示的PsbA2启动子插入质粒pBluescript II SK+的SalI‑EcoRI内切酶酶切位点之间，将核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示的5ST1T2PCR转录终止子插入质粒pBluescript II SK+的PstI‑SmaI内切酶酶切位点之间，制得重组空白质粒；（2）将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所述的基因片段插入步骤（1）制得的重组空白质粒的EcoRI‑PstI内切酶酶切位点之间，制得重组质粒；（3）将步骤（2）制得的重组质粒转化集胞藻Synechocystis sp.PCC6803，制得转基因集胞藻；（4）将步骤（3）制得的转基因集胞藻扩大培养后，经提取，制得咖啡酸。