[发明专利]海水发酵型产生物表面活性剂菌株的筛选方法

摘要

本发明公开了属于发酵工程领域中一种筛选可利用海水进行发酵生物表面活性剂菌种的筛选方法。首先将海水、土样等样品按5％的量添加至含盐且浓度逐渐提高(1％、2％、3％和3.5％)的烃降解培养基中，在30℃、180rmp转速的恒温摇床上进行富集培养，每次3-5天。富集后的菌液稀释到一定程度后在含NaCl3.5％的血平板上涂布培养，30℃培养1-3d，取血平板上透明圈边缘清晰而大的菌落，接种于肉胨斜面30℃培养1-2d后，4℃保存备用。各菌株液体肉胨培养基(营养肉汤培养基)培养后，按5％的接种量接入含NaCl3.5％或海水配制的产表面活性剂培养基中，30℃培养3d后评价产表面活性剂的能力，即得可利用海水发酵产表面活性剂菌株，技术路线如附图所示。

主权项

一种海水发酵型产生物表面活性剂菌株的筛选方法，其特征在于，该方法的具体步骤如下：(1)采样主要采集以下样品：近海海水；沿海滩涂植物根际土壤；盐场卤水；盐场土样。采集后立刻带回保存于4℃中。(2)富集培养取土样和水样接种于盐度逐渐升高的产表活培养基中，即由1％、2％、3％升至3.5％，在30℃、150rmp转速的恒温摇床上振荡培养，每次3‑5天时间，培养基明显乳化时按10％的量接种下一盐度的产表活培养基。直到含盐3.5％的培养基培养完成，驯化结束。(3)高盐血平板分离取富集后的菌液，稀释至适宜倍数涂布于血平板上，30℃培养1‑3天，直到有明显的溶血圈产生。(4)菌种保存、编号挑取菌落特征有代表性、产明显溶血圈的菌落30个以上接种于斜面中30℃培养1‑2天长出菌苔后，置4℃备用。(5)海水发酵验证各菌株用肉胨培养基培养种子后，按5％的接种量接产表活培养基(含3.5％的NaCl)和海水产表活培养基进行摇瓶发酵，在30℃、150rmp转速的恒温摇床上培养3d后测定表面张力和发酵液排油圈大小。测定表面张力采用表面张力仪，排油圈测定大小的方法是：在90mm培养皿小盖中，加入20mL去离子水，滴加100μL柴油，形成油膜后，再在油膜中心用微量取样器加入10μL的发酵液。 如果排油圈直径超过培养皿小盖的直径，则将发酵液稀释10倍后再加入。取排油圈较大且表面张力明显降低的菌株3‑5株，之后进行生理生化分析和分子鉴定，以获得菌株的属种分类信息，便于下一步的改良和发酵工艺优化。