[发明专利]树突状细胞的快速分离方法

摘要

本发明公开了分离富集全血中树突状细胞（Dendriticcells，DC）的方法，更好地为树突状细胞进行后续研究提供基础，涉及生物医学领域。方法包括超支化聚合物与鼠抗人树突状细胞单克隆抗体共价偶联、鼠抗人树突状细胞单克隆抗体修饰的超支化聚合物再包被长链生物素分子、鼠抗人树突状细胞单克隆抗体和长链生物素共修饰的超支化聚合物捕获全血样品中的DC、链霉亲和素修饰的纳米磁珠识别并偶联全血中长链生物素化超支化聚合物、被捕获DC的分离及重悬等步骤。重悬液可以直接进行后续分析，与传统的细胞分离方法相比，该方法更适用于在复杂全血样品中对DC进行磁分离，提高了全血样品中DC分离效率。

主权项

树突状细胞的快速分离方法，其特征在于包括以下步骤：（1）每称取1.0 mg超支化聚合物，悬浮于4 mL 0.01 mol/L，pH 8.0 PBS磷酸缓冲液中，搅拌滴加25%的戊二醛水溶液545 μL，使戊二醛的终浓度为3%，在摇床150 r/min的转速下室温反应3.5 h；加入18.75 mg鼠抗人树突状细胞单克隆抗体，使其终浓度达到3 mg/mL左右，摇床150 r/min 的转速下室温反应24 h；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得超支化聚合物‑抗体复合物；（2）取15.7 mg 长链生物素，悬浮于4 mL 0.01 mol/L，pH 8.0 PBS磷酸缓冲液中，搅拌滴加25%的戊二醛水溶液545 μL，使戊二醛的终浓度为3%，在摇床150 r/min的转速下室温反应3.5 h；加入1.0 mg超支化聚合物‑抗体复合物，在摇床150 r/min的转速下室温反应24 h；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得长链生物素‑超支化聚合物‑抗体复合物；（3）每取1 mL正常人新鲜全血，加入0.2 mg抗体和长链生物素共修饰的超支化聚合物即步骤（2）长链生物素‑超支化聚合物‑抗体复合物，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min；加入0.1 mg修饰有链霉亲和素的纳米磁珠，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min，常规磁力架分离3 min；（4）磁力分离后，去离子水轻轻清洗后，用PBS缓冲液重悬即得富集有树突状细胞的纳米磁珠‑链霉亲和素‑长链生物素‑超支化聚合物‑抗体‑DC复合物。