[发明专利]一种乌拉尔甘草与胀果甘草种子的鉴定方法

摘要

本发明公开了一种乌拉尔甘草与胀果甘草种子的鉴定方法，包括酶液的制备、制凝胶板、点样与电泳、SOD同工酶染色方法、品种确认等步骤。它主要是利用乌拉尔甘草与胀果甘草种子的生理生化差异，在使用超氧化物歧化酶（SOD）同工酶酶谱作为区别乌拉尔甘草与胀果甘草种子的指标。若待测种子的SOD同工酶酶谱与标准酶谱左侧两泳道相同，即为乌拉尔甘草种子，若与右侧两泳道相同即为胀果甘草种子。本发明的鉴定方法具有鉴定简单、快速、准确的优点。

主权项

1.一种乌拉尔甘草与胀果甘草种子的鉴定方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）酶液的制备：取待鉴定的甘草种子，在自来水中浸泡6-8小时，在室温下置于器皿中，保持湿润令其发芽，待胚根长到1-1.5cm时，按照1g样品加入1ml电极缓冲液研磨，在0-4℃下，以10000转/分钟，离心10分钟，上清液即为SOD提取液；所述的电极缓冲液指的是pH 8.3的电极缓冲液；（2）制凝胶板：将玻璃板洗净放好封胶条，装入电泳槽，插入楔板；然后灌胶：先灌分离胶，用水封住，待出现界限后，吸干水封，再灌入浓缩胶，插入梳子，待浓缩胶凝固后，拔去梳子，去掉封胶条，重新装好电泳槽；其中分离胶与浓缩胶的配制如下：（3）点样与电泳 ：取步骤1的上清液30微升，加入相应的泳道中；然后先用100v电压，电泳20分钟，待溴酚蓝指示剂走出浓缩胶后改为140V电压，电泳1小时10分钟，待溴酚蓝指示剂即将走出凝胶板时停止电泳，取出凝胶板，进行SOD同工酶染色；（4）SOD同工酶染色方法：电泳结束后，取出凝胶板，在黑暗条件下用2.45×10^-3mol/L NBT溶液浸泡20分钟，然后再在核黄素溶液中，在黑暗条件下浸泡15分钟，最后浸泡在EDTA—Na₂ pH7.8的磷酸缓冲液，用200W白炽灯照光，至背景显出蓝色或者紫褐色，同时出现无色透明条带为止，立刻照相或保存于8%乙酸中，即可得待测样品的SOD同工酶酶谱；（5）品种确认：若待测种子的SOD同工酶酶谱与标准酶谱左侧两泳道相同，即为乌拉尔甘草种子，若与右侧两泳道相同即为胀果甘草种子。