[发明专利]利用重组毕赤酵母生产蛋白A的方法

摘要

本发明涉及一种利用重组毕赤酵母生产金黄色葡萄球菌蛋白A的工艺，所述生产工艺为利用质粒pPIC9K将蛋白A抗体结合区基因整合入毕赤酵母GS115基因组中，并经筛选、表达及纯化条件优化获得有活性的外泌表达蛋白A。本发明提供了所述重组菌的制备、筛选，以及利用该菌株表达蛋白A的培养、发酵方法及其所表达的蛋白A纯化方法。该菌株首先在BMGY培养基中培养约17小时后，再在pH2.6-5.6，含0.5%-2.0%甲醇的培养基BMMY中进行表达筛选和优化。然后在发酵罐中对重组蛋白A表达进行进一步优化，最终蛋白A表达量可达每升菌液8-10g，约占外泌总蛋白的80%。并通过除盐柱过滤和离子交换层析纯化得到高纯度的蛋白A，收率近80%。此工艺为低成本大规模生产高纯度蛋白A创造了有利条件。

主权项

一种利用重组毕赤酵母生产蛋白A的方法，其特征是：通过分泌型表达质粒pPIC9K将蛋白A抗体结合功能区基因整合入毕赤酵母GS115基因组中，制备了可外泌表达蛋白A的重组毕赤酵母rGS115‑spa，并筛选得到了高表达量的菌株；利用经过优化的BMGY/BMMY和BSM培养基，以甲醇为诱导剂的培养方法实现了重组蛋白A的高密度发酵分泌表达；并利用脱盐柱偶联离子交换层析柱的方法对所得的含有蛋白A的发酵液进行分离纯化，获得纯度接近色谱纯，后收率约为80%的蛋白A产物。