[发明专利]一种乳酸片球菌活菌制剂及其制备方法

摘要

本发明涉及一种乳酸片球菌活菌制剂的生产方法，属于微生物技术领域，具体涉及一种乳酸片球菌活菌制剂的液体厌氧发酵生产方法。它包括以下步骤：采用乳酸片球菌作为发酵菌种，接种于经过优化的液体培养基中，在温度为37~40℃的条件下培养16~18h，放罐并测定活菌数，用植物淀粉吸附发酵液并干燥、粉碎和包装，制成活性稳定的乳酸片球菌制剂。本发明的优点：用普通发酵罐即可完成乳酸片球菌的高密度发酵，操作简单，效果稳定，能耗低；不用离心机和冷冻干燥机等设备，降低了生产成本，提高了生产效率，易于推广使用。

主权项

一种乳酸片球菌活菌制剂的制备方法包括以下步骤：  （1） 菌种活化：   本发明采用乳酸片球菌作为发酵菌种，购于广东省微生物菌种保藏管理中心，保藏编号：GIM1.263，将‑80℃保存的乳酸片球菌活菌菌种在MRS培养基（蛋白胨10.0 g，牛肉膏10.0 g，酵母膏5.0 g，柠檬酸氢二铵2.0 g，葡萄糖20.0 g，吐温80 1.0 mL，乙酸钠5.0 g，磷酸氢二钾2.0 g，硫酸镁0.58 g，硫酸锰0.25 g，琼脂粉 15.0 g，蒸馏水1 000 mL，pH 6.2~6.6，高温高压灭菌）固体斜面上划线，37℃培养16个小时左右，菌种活化一般1~3次；   （2）制备一级种子：将活化的乳酸片球菌，用接种环挑取一环接种于20mL MRS液体（蛋白胨10.0 g，牛肉膏10.0 g，酵母膏5.0 g，柠檬酸氢二铵2.0 g，葡萄糖20.0 g，吐温80 1.0 mL，乙酸钠5.0 g，磷酸氢二钾2.0 g，硫酸镁0.58 g，硫酸锰0.25 g，蒸馏水1 000 mL，pH 6.2~6.6，高温高压灭菌）的试管中，37℃深层静置培养16小时左右，菌液以3~5%的接种量接种到装有适当体积MRS培养基的三角瓶中，37℃深层静置培养16小时左右备用；若培养基灭菌后未立即使用，则需在沸水浴中加热10min驱氧后使用；   （3）配制液体发酵培养基：培养基包括的原料及重量份数为：玉米粉40~70，小麦粉15~30，豆饼粉0~15，葡萄糖10~15，酵母浸出粉1~3，蛋白胨2~4，原料当以克计，蒸馏水相应以mL计的份数为800~1000，溶解，加入发酵罐内进行100~121℃，时间为10~30分钟的高温高压灭菌，在发酵罐降温至35~45℃时，加入无机盐0.7~1.5g/1000mL基料，无机盐选自CaCl2 、MgSO4·7H2O及MnSO4·H2O中的两种或者三种，为避免形成沉淀，在加入过程中搅拌均匀，然后加入液体石蜡至厚度为1~2cm；（4）液体发酵：将经过灭菌处理的液体发酵培养基按照3~5%的接种量接入一级种子菌，搅拌均匀，然后加入液体石蜡至厚度为1~2cm，保持温度为37~40℃，pH 6.0‑6.8，培养16~18个小时放罐，将乳酸片球菌活菌培养物进行菌落计数，经过这样发酵的活菌体浓度可达1.0×109CFU/mL以上；（5）用植物淀粉吸附发酵液：以玉米粉、豆饼粉或小麦粉，或者其任意组合，作为发酵液的吸附剂，并将植物淀粉吸附的发酵液混合物进行烘干干燥，粉碎和包装，制成用于畜禽养殖的微生态饲料添加剂。