[发明专利]从鹿茸冻干粉中提取IGF-1的方法

摘要

本发明涉及一种从鹿茸冻干粉中提取IGF-1的方法，属于从鹿茸中提取活性成分的方法。取鹿茸冻干粉加入酸性缓冲液提取，所得的提取液以10-30kDa的超滤膜在超滤杯中浓缩，分离提纯，冷冻干燥。优点在于以鹿茸冻干粉为原料，采用酸性缓冲液进行提取，产率较其他方法可提高2-4倍。纯化时没有采用目前常用的离子交换树脂和葡聚糖凝胶，而是将小分子药物纯化时常用的反相柱层析法应用于IGF-1的分离纯化中，采用酸性的甲醇-水或乙腈-水系统梯度洗脱，结果得到纯度高于90%的IGF-1产品，与之前的IGF-1产品相比，极大地提高了产品的产率和纯度。

主权项

一种从鹿茸冻干粉中提取IGF‐1的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)鹿茸冻干粉的制备：将在‑20℃以下冷冻贮藏的鲜鹿茸，锯成小段，并用切片机切成2‑3mm厚的薄片，然后将鹿茸片平铺在表面皿中，在‑45℃以下，6pa条件下，进行冷冻干燥48h，经冷冻干燥后的鹿茸片用超低温球磨粉碎机粉碎成300目的粉末，在‑20℃下贮存待用；(2)酸性缓冲液超声波提取：取步骤(1)制备的鹿茸冻干粉一定量称重，加入3‑5倍体积的酸性缓冲液提取，所述的酸性缓冲溶液是50mM的磷酸盐缓冲液用Tris‐HCl调pH2‑3，低温下超声提取20‑40分钟，减压抽滤，滤液于4℃低温放置，药渣重复上述步骤提取，共计提取3次，合并3次的提取液；(3)浓缩：步骤(2)所得的提取液先以10‑30kDa透析袋进行透析，加入聚乙二醇，浓缩，在冰浴下继以10‑30kDa的超滤膜在超滤杯中浓缩；(4)分离提纯：反相柱层析法，将步骤(3)所得的浓缩液上反相柱，固定相为C₁₈，洗脱程序为：先以水洗脱，继以含有1％～5％三氟乙酸的甲醇‑水1：4洗脱，再用含有1％～5％三氟乙酸的甲醇‑水1：1洗脱，收集流出液，合并含有IGF‐1的部分；或采用制备型高效液相色谱，色谱柱固定相为C₈、C₁₈或C₄，流动相洗脱程序为：30分钟内由含有1％～5％三氟乙酸的50％乙腈升至含有1％～5％三氟乙酸的90％乙腈的梯度洗脱，收集含有IGF‐1的流出液；(5)冷冻干燥：将步骤(4)所得含有IGF‐1的流出液在‐20℃下预冷冻，在‐40℃至‐60℃下进行冷冻干燥。