[发明专利]基于蛋白质的壳聚糖纳米颗粒的制备方法及其作为核酸药物载体的应用

摘要

本发明涉及基于蛋白质的壳聚糖纳米颗粒的制备方法及其作为核酸药物载体的应用，该方法先制备得到一种基于蛋白质的壳聚糖纳米颗粒，利用壳聚糖表面的大量正电荷来吸附核酸类药物，并最终将核酸药物顺利载带进入细胞。这种方法制备的壳聚糖纳米颗粒尺寸小，分散均匀，容易被细胞吸收；而且由于壳聚糖较好的生物相容性和可生物降解的特性，因此该纳米颗粒是一种生物安全性极好的理想的核酸药物载体，这对于核酸类药物的研发具有重要的意义。

主权项

基于蛋白质的壳聚糖纳米颗粒的制备方法，其特征在于该方法具有以下的工艺步骤：a. 将壳聚糖完全溶解于酸性溶液中进行质子化，后用乙醇将其沉淀出来研磨烘干待用；蛋白质加入到pH值7.0‑10.0、10‑50mM的缓冲溶液中， 加入上述质子化壳聚糖，壳聚糖中氨基葡萄糖单元与蛋白质的摩尔比为2000:1‑10000:1，室温搅拌至完全溶解后，加入戊二醛水溶液，戊二醛与氨基葡萄糖单元的摩尔比为0.35:1‑ 0.7:1，室温搅拌至反应完全后，超滤洗涤三次以除去未反应的壳聚糖，即可得包裹蛋白质的壳聚糖纳米颗粒；b. RNA的载带：取上述壳聚糖纳米颗粒NPs与RNA在室温下混合均匀，与Hela细胞共培养6‑48h，纳米颗粒的终浓度为10‑200μg/mL，RNA终浓度为10‑200nM，即质量比为0.06% ‑26.6%RNA/NPs。