[发明专利]重组植原体免疫主导膜蛋白的纯化方法及其应用

摘要

本发明提供了一种重组植原体免疫主导膜蛋白的纯化方法及其应用。上述重组植原体免疫主导膜蛋白的纯化方法，通过使用亲和层析法将重组菌表达的可溶性植原体免疫主导膜蛋白进行提纯，尤其是将包涵体裂解，结合利用透析法和亲和层析法对包涵体中的不溶性植原体免疫主导膜蛋白进行提纯，并通过对提纯的条件和工艺参数进行优化，从而大大提高重组植原体免疫主导膜蛋白的纯化效果，提纯度可达95%，而传统方法的提纯度为60%。该方法工艺简单、易于操作，并且产出量高、降低了生产成本。

主权项

1.一种重组植原体免疫主导膜蛋白的纯化方法，包括如下步骤：获得表达植原体免疫主导膜蛋白的重组菌，诱导表达；破碎经诱导表达后的重组菌，分离得到上清液一和沉淀物一；将所述上清液一加入至树脂悬液与结合缓冲液混合液中，所述树脂悬液与所述结合缓冲液的体积比为1~4：1~5，在4~8℃的温度下振荡1~2小时后静置沉降，然后依次经漂洗、洗脱处理，得到可溶性重组植原体免疫主导膜蛋白溶液；将所述沉淀物一悬重洗涤后并经孵育处理，得到所述沉淀物一的溶解液；将所述沉淀物一的溶解液加入至所述树脂悬液与所述结合缓冲液混合液中，所述树脂悬液与所述结合缓冲液的体积比为1~4：1~5，在4~8℃的温度下振荡1~2小时后静置沉降，然后依次经漂洗、洗脱处理，得到包涵体重组植原体免疫主导膜蛋白的溶液，其中，所述沉淀物一洗涤步骤使用包涵体洗涤缓冲液，所述洗涤缓冲液包含50~60mmol/L Tris‑HCl，90~100mmol/L NaCl，0.5~1mmol/L 乙二胺四乙酸，7~8 mmol/L聚乙二醇辛基苯基醚，pH8.0~8.2；将所述可溶性重组植原体免疫主导膜蛋白溶液与所述包涵体中重组植原体免疫主导膜蛋白的溶液进行透析浓缩，得到所述重组植原体免疫主导膜蛋白；所述树脂悬液为50%的Ni‑NTA‑His•Bind树脂悬液；所述结合缓冲液为Ni‑NTA结合缓冲液，所述Ni‑NTA结合缓冲液中的咪唑浓度为0~10 mM/L，pH值为7~8。