[发明专利]一种人凝血因子Ⅷ的制备方法

摘要

本发明涉及一种人凝血因子Ⅷ的制备方法，包括冷沉淀溶解、聚乙二醇沉淀、离心分离、灭活、第二次聚乙二醇沉淀、第二次离心分离、沉淀溶解、冻干及第二次病毒灭活等步骤。本发明所用全部试剂均为常规试剂，价格便宜，用肝素钠作为溶解液，提高了活性的回收率，且不使用氢氧化铝作为沉淀剂，避免了最终产品中残留铝。本发明操作简便、整个过程时间短、适合大规模工业生产。

主权项

一种人凝血因子Ⅷ的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)将冷沉淀用40‑80IU/ml肝素钠溶解液溶解，调节pH至6.1‑6.5，溶液温度维持在20‑35℃；(b)将聚乙二醇溶液加入到步骤a)获得的溶液中混合均匀，得到聚乙二醇浓度为2.5%‑4.5%(wt/vol)的混合溶液，所述混合溶液的温度维持在20‑30℃；(c)对步骤b)获得的混合溶液进行离心，取上清液；(d)将磷酸三丁酯及聚山梨酯‑80加入到步骤c)获得的上清液中混合均匀得到混合溶液，并对所述混合溶液进行灭活；(e)将聚乙二醇溶液加入到步骤d)获得的溶液中混合均匀，得到聚乙二醇浓度为10%‑14%(wt/vol)的混合溶液，所述混合溶液的温度维持在10‑20℃；(f)对步骤e)获得的混合溶液进行离心，收集沉淀；(g)对步骤f)获得的沉淀进行洗涤，所述洗涤是指将所述沉淀溶解于1.5‑2.5M甘氨酸洗涤液中，搅拌后进行离心；(h)将步骤g)获得的沉淀溶解于溶解液后冷冻干燥得到所述人凝血因子Ⅷ，其中，每10千克所述溶解液内含枸橼酸三钠4.5‑8.5克及甘氨酸70‑110克。