[发明专利]一种用复合载体固定化双酶制备玉米蛋白活性肽的方法有效

专利信息
申请号: 201310258216.3 申请日: 2013-06-25
公开(公告)号: CN103352064A 公开(公告)日: 2013-10-16
发明(设计)人: 陈海霞;王艳伟;王佳;邢利沙 申请(专利权)人: 天津大学
主分类号: C12P21/06 分类号: C12P21/06;C12N11/10;C12N11/04
代理公司: 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 代理人: 陆艺
地址: 300072*** 国省代码: 天津;12
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摘要: 发明公开了一种用复合载体固定化双酶制备玉米蛋白活性肽的方法,包括如下步骤:将碱性蛋白酶液加入到海藻酸钠溶液中,搅拌,加入胰蛋白酶液,搅拌,静置,获得包有双蛋白酶液的海藻酸钠溶液;将包有双蛋白酶液的海藻酸钠溶液逐滴滴入到不断搅拌下的CaCl2-壳聚糖混合溶液中,硬化成球,过滤,烘干,得到复合载体固定化双酶凝胶珠;配制玉米醇溶蛋白乙醇溶液,调节pH,加入复合载体固定化双酶凝胶珠,反应,过滤,滤液调pH,得到玉米蛋白活性肽液;制备过程简便,无毒,安全,复合载体固定化双酶凝胶珠极易分离、稳定性高,可重复利用,贮存酶活损失小,降解所得玉米蛋白肽生物活性高,玉米醇溶蛋白水解度优于游离酶降解所得水解度。
搜索关键词: 一种 复合 载体 固定 化双酶 制备 玉米 蛋白 活性 方法
【主权项】:
一种用复合载体固定化双酶制备玉米蛋白活性肽的方法,其特征是包括如下步骤:(1)用pH=10的磷酸盐缓冲液配制1mg/mL碱性蛋白酶液;在40℃~50℃水浴条件下,用pH=6.8的磷酸盐缓冲液配制1mg/mL胰蛋白酶液;在50~80℃水浴、搅拌条件下,将海藻酸钠加入到pH=6.5~8.0的磷酸盐缓冲液中,使海藻酸钠充分溶解,配成质量分数为2%~3%的海藻酸钠溶液;(2)按体积比为0.5~2:5的比例将碱性蛋白酶液加入到海藻酸钠溶液中,搅拌0.5~1h,加入胰蛋白酶液,搅拌0.5~1h,静置1~2h,获得包有双蛋白酶液的海藻酸钠溶液,所述胰蛋白酶液与所述碱性蛋白酶液的体积比为1:1~2;(3)称取脱乙酰度≥90.0%的壳聚糖,以体积分数为0.5%~1%的乙酸水溶液为溶剂,在50℃~80℃水浴下溶解0.5~1h,配制得1.5g/mL壳聚糖溶液;按体积比为1:2~3的比例,将所述壳聚糖溶液和浓度为2g/mL的CaCl2水溶液混合,搅拌10~20min,静置20~40min,获得CaCl2‑壳聚糖混合溶液;(4)将包有双蛋白酶液的海藻酸钠溶液逐滴滴入到不断搅拌下的步骤(3)获得的CaCl2‑壳聚糖混合溶液中,硬化成球0.5~1.5h,过滤,水洗3~5次,40~50℃烘干,得到复合载体固定化双酶凝胶珠,4℃冰箱保存备用;(5)称取玉米醇溶蛋白放入体积浓度为75%~90%的乙醇水溶液中,于50~60℃水浴10~15min,使玉米醇溶蛋白溶解,配成底物浓度为2.5~3.5g/mL的玉米醇溶蛋白液,调节pH为8.0~9.0,加入复合载体固定化双酶凝胶珠,在50~60℃下,反应20min~1h,过滤,将滤液调节pH为8.0~9.0,得到玉米蛋白活性肽液;所述玉米醇溶蛋白与复合载体固定化双酶凝胶珠的质量比为1:0.5~2。
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