[发明专利]一种从克氏瓶直接到生物反应器的细胞培养方法

摘要

本发明公开了一种从克氏瓶直接到生物反应器的细胞培养方法，包括以下步骤：A1、细胞的复苏；A2、克氏瓶内细胞的消化；A3、从克氏瓶到生物反应器的培养；A4、生物反应器内细胞的增殖；本发明将细胞在克氏瓶中复苏，待其长成单层细胞，消化分散，直接转入到生物反应器中，在这种培养技术中，细胞的扩大培养减少了很多中间环节，从而使得污染的概率大大降低。细胞在生物反应器中的微载体上生长，长成单层布满整个载体，在生物反应器中将细胞进行消化分散，再通过管道加入微载体，继续细胞的扩大培养。因此，在此细胞的扩大培养过程中，不加入抗生素进行细菌污染控制，有利于细胞的健康增殖，无抗生素残留。

主权项

一种从克氏瓶直接到生物反应器的细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：A1、细胞的复苏；从液氮罐中取出冻存的细胞，置37℃水浴中融化，移入装有含血清培养基的克氏细胞培养瓶中，置37℃、5%CO2培养箱中，培养24小时，换液一次，继续培养24～48小时，至细胞长成致密单层；A2、克氏瓶内细胞的消化；去掉克氏细胞培养瓶中的细胞营养液，用0.25%的胰酶消化，细胞经过消化，通过计数，细胞数达5～8×106个；A3、从克氏瓶到生物反应器的培养；将消化分散的细胞通过管道转入到含灭菌微载体和营养液的生物反应器中，让细胞在生物反应器内的微载体表面生长；A4、生物反应器内细胞的增殖；待细胞在微载体表面长成单层后，在生物反应器内加入0.25%的胰酶，消化分散微载体表面的细胞；通过管道加入微载体，使细胞在更多的微载体上生长，从而完成细胞在生物反应器内的增殖。