[发明专利]一种确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法

摘要

一种确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法，步骤为：1）将蚯蚓样品与Na2SO4研磨制备组织浆液，用浸提剂清洗得到浸提液；2）经搅拌、振荡、超声提取、低温高速离心分离，收集上清液；3）将上清液过聚四氟乙烯滤膜去除杂质，用高效液相色谱测定土霉素含量；4）分别计算各种浸提剂对土霉素的加标回收率；5）将确定的浸提剂，分别进行一次浸提和二次浸提，通过方差分析确定最佳方案。本发明的优点是：该方法通过实验确定体积比为4:1的甲醇与水的混合液是提取蚯蚓中土霉素的最佳浸提剂；采用该最佳浸提剂在室温下提取一次完全能够达到有效浸提的目的，提取时间短、成本费用低，方法简单、易于实施且提取效率高，易于推广应用。

主权项

一种确定蚯蚓中土霉素残留浸提剂的实验方法，其特征在于包括以下步骤： 1）将新鲜的蚯蚓样品置于瓷质研钵中，加入无水Na2SO4，在氮气条件下研磨制备组织浆液，转移磨碎后的组织浆液，用浸提剂反复清洗研钵至洗净残留物，收集全部清洗液并加入浸提剂至所需的体积，得到浸提液，所述浸提剂为具有潜力的各种浸提剂；2）将上述浸提液在18‑25℃、200r/min条件下振荡20min，然后在100W条件下超声提取20min，用冷冻离心机在2500rmp、4℃条件下进行高速离心分离25min，收集上清液；3）将上述上清液过0.45μm聚四氟乙烯滤膜去除杂质，采用高效液相色谱测定土霉素含量；4）分别计算各种浸提剂对土霉素的加标回收率，选择提取率在80%以上的浸提剂，在此基础上，选择同一浸提剂对土霉素浸提率的重复性差异性较小、浸提比较稳定的浸提剂，从而确定对蚯蚓中土霉素提取比较适合的浸提剂；5）采用上述确定的浸提剂，分别进行一次浸提和二次浸提，通过方差分析进行比较其浸提效果的差异性，并进一步对其浸提稳定性进行检测，在一次浸提和二次浸提总量之间不呈现显著差异的基础上，选择一次浸提对土霉素进行浸提，从而简化提取次数，提高提取效率。