[发明专利]一种制备热稳定的包含氧载体的组合物的方法

摘要

本发明提供了一种高度纯化和热稳定的交联非聚合四聚体血红蛋白，其适合用于哺乳动物而不导致肾损伤和血管收缩。进行高温和短时间(HTST)热加工步骤以有效地去除不合乎需要的二聚体形式的血红蛋白、未交联的四聚体血红蛋白和血浆蛋白杂质。在热处理后和任选地在热处理前添加N-乙酰半胱氨酸保持了低水平的高铁血红蛋白。该热稳定的交联四聚体血红蛋白可以改善和延长正常和低氧组织中的氧合。在另一方面，该产品用于治疗多种类型的癌症诸如白血病、结直肠癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、鼻咽癌和食管癌。本发明的四聚体血红蛋白还可以用来预防手术切除肿瘤后的肿瘤转移和复发。此外，本发明的四聚体血红蛋白可以在化疗和放疗之前施用于患者。

主权项

一种由以下方法形成的非聚合的交联四聚体血红蛋白，所述方法包括：a)提供至少包含红细胞和血浆的哺乳动物全血；b)将所述哺乳动物全血中的红细胞与血浆分离；c)过滤与血浆分离的红细胞从而获得滤过的红细胞级分；d)洗涤所述滤过的红细胞级分从而去除血浆蛋白杂质，得到洗涤过的红细胞；e)在快速细胞裂解设备中通过精确控制的低渗裂解方法破裂所述洗涤过的红细胞2‑30秒或足以裂解所述红细胞的时间，从而以50‑1000升/小时的流速形成包含破裂的红细胞的裂解产物的溶液；f)进行过滤以从所述裂解产物中去除至少一部分废截留物；g)从所述裂解产物中提取第一血红蛋白溶液；h)使用超滤滤器进行第一超滤过程，所述超滤滤器被配置成去除分子量比血红蛋白高的杂质，以从第一血红蛋白溶液中进一步去除任何病毒和残留废截留物，从而获得第二血红蛋白溶液；i)对该纯化的血红蛋白溶液进行流通柱色谱以去除蛋白杂质；j)使用超滤滤器进行第二超滤过程，所述超滤滤器被配置成去除杂质和浓缩所述纯化的血红蛋白溶液；k)在缺氧环境中通过富马酸二‑3,5‑二溴水杨酸酯至少交联所述血红蛋白的α‑α亚单位以形成交联血红蛋白，其中所述交联血红蛋白是非聚合的交联四聚体血红蛋白；l)用合适的生理缓冲液交换在步骤k)中形成的交联溶液；m)通过切向流过滤去除任何残留的化学物质；n)在缺氧环境中热处理所述交联血红蛋白从而使任何残留的未反应的血红蛋白、不稳定的血红蛋白和任何其他蛋白杂质变性并沉淀，使得得到的热稳定的交联四聚体血红蛋白具有检测不到浓度的二聚体并且基本上由非聚合的交联四聚体血红蛋白组成；o)在热处理所述交联四聚体血红蛋白后立即加入N‑乙酰半胱氨酸从而保持低水平的高铁血红蛋白；和p)通过离心或过滤设备去除沉淀物以形成澄清溶液从而获得纯化的和热稳定的交联四聚体血红蛋白。