[发明专利]龙须菜试剂级R‑型藻红蛋白的高效分离纯化方法

摘要

本发明属于海洋天然活性物质制备技术，具体的说是一种龙须菜试剂级R‑型藻红蛋白的高效分离纯化方法。将粉碎的原料大型经济海洋红藻龙须菜加入其10‑30体积的PBS缓冲液中浸泡，浸泡后以9000rpm/min‑15000rpm/min离心20‑30min，收集上清液进行浓缩；浓缩液经硫酸铵进行分级盐析，收集沉淀并用PBS缓冲液溶解，溶解后进行透析24‑‑48小时；所得透析液经强阴离子Source‑15Q层析柱纯化，以含NaCl的PBS缓冲液作为洗脱液，流速0.5ml/min,收集第360min‑510min的洗脱液，即为纯度大于5.0的R‑型藻红蛋白溶液。采用本发明方法得到的蛋白回收率高，纯化效果好，易于放大，上样量大等特点实现了对藻红蛋白高效分离纯化。

主权项

一种龙须菜试剂级R‑型藻红蛋白的高效分离纯化方法，其特征在于：将原料大型经济海洋红藻龙须菜粉碎至粒径0.1‑0.5mm，粉碎后加入至其10‑30体积的PBS缓冲液中，在4℃下，浸提24‑48小时，浸提液再于4‑8℃，以9000rpm/min‑15000rpm/min条件下离心20‑‑30min，离心后上清过滤，滤液用50kd的浓缩板浓缩，待用；浓缩液中加入硫酸铵使其饱和度达到25％，并静置12‑15个小时，静置后于4℃，12000rpm/min‑15000rpm/min条件下离心20‑30min，收集上清；上清液中再加入硫酸铵使其饱和度达到45％，静置6‑12小时，而后于4℃，12000rpm/min‑15000rpm/min条件下离心20‑30min，收集沉淀并用PBS缓冲液溶解，溶解后进行透析24‑48小时；所得透析液经强阴离子Source‑15Q层析柱纯化，柱规格1.6×20cm，柱床高度6‑8cm，以含不同浓度NaCl的PBS缓冲液作为洗脱液进行梯度洗脱，洗脱的流速为0.5ml/min，收集第360min‑510min的组分，洗脱总体积为400‑500ml,即为纯度大于5.0的R‑型藻红蛋白溶液；所述PBS缓冲液为50‑100mM/L PBS缓冲液，pH6.0‑7.0；所述洗脱液为0‑0.6M NaCl的1mM/L‑25mM/L PBS缓冲液，pH6.0‑7.0。