[发明专利]一种斑点叉尾鮰物种鉴定试剂盒及其使用方法

摘要

本发明涉及一种斑点叉尾鮰物种鉴定试剂盒及其使用方法，试剂盒包括以下分离包装的试剂：裂解液、抽取液Ⅰ、抽取液Ⅱ、PCR反应液、酶切反应液、阴性对照和阳性对照；使用方法包括DNA提取、PCR扩增和酶切鉴定。本发明的试剂盒及其使用方法可以从分子水平鉴定斑点叉尾鮰物种，操作简单易行、快速实用，所耗时间短暂，无论完整的斑点叉尾鮰鱼体还是已加工好的成品或半成品，均可快捷方便地鉴别出斑点叉尾鮰物种，极其适合对进出口贸易中斑点叉尾鮰物种进行快速鉴定。

主权项

一种斑点叉尾鮰物种鉴定试剂盒，其特征在于，包括以下分离包装的试剂：裂解液、抽取液Ⅰ、抽取液Ⅱ、PCR反应液、酶切反应液、阴性对照和阳性对照；所述裂解液PH值为8，包括以下组分：200mmol/L NaCl、20mmol/LTris‑HCl、50mmol/L EDTA、1%SDS，其余为水；所述抽取液Ⅰ包括苯酚、氯仿和异戊醇，其中苯酚、氯仿与异戊醇的体积比为25:24:1；所述抽取液Ⅱ包括氯仿和异戊醇，其中氯仿与异戊醇的体积比为24:1；所述PCR反应液包括以下组分：10×PCR Buffer、MgCl2、dNTPs、上游引物、下游引物、Taq DNA聚合酶，其余为超纯水；具体引物序列为：上游引物：5’‑GTCGCCTCCGTACTGTATTTCTCC‑3’，下游引物：5’‑GGGTCCATCTTAACATCTTCAGTG‑3’；所述酶切反应液包括10×Buffer和EcoR Ⅰ；所述阳性对照为PCR扩增后已酶切鉴定过的斑点叉尾鮰D‑loop标准样品；所述阴性对照为PCR扩增后未酶切的斑点叉尾鮰D‑loop标准样品。