[发明专利]一种利用皮肤来源的祖细胞制备组织工程脊髓的方法

摘要

本发明公开了一种利用皮肤来源的祖细胞制备组织工程脊髓的方法，包括如下步骤：1)、分离SKPs，传代得SKPs原代细胞；2)、将分离得到的SKPs原代细胞移入扩增培养基中进行扩增；3)、制备组织工程脊髓，将组织工程脊髓材料饱和水溶液，滴加到含Neurotrophin-3(NT3)、维甲酸和Neuregulin的生理盐水溶液中；将扩增后的SKPs，以脑源性神经营养素腺病毒表达载体感染，将细胞接种到工程脊髓材料材料上，进行培养。本发明的方法中，组织工程脊髓可有效地促进细胞增殖，其向神经元和少突胶质细胞分化的比例为4.8％和1.5％左右，远远高于单纯支架材料的1.8％和0.5％。

主权项

一种利用SKPs制备组织工程脊髓的方法，包括以下步骤：1)、分离SKPs将皮肤样品酒精消毒后，胰酶消化，然后将真皮组织剪成细胞片并碎吹打成细胞悬液，过滤后接种于含DMEM培养液的培养瓶中，2h后，将悬浮的细胞离心后转移到SKPs生长培养基中，培养约7天后，可见悬浮克隆样生长的细胞SKPs；2)、SKPs快速扩增将分离得到的SKPs原代细胞移入扩增培养基中进行扩增，所述扩增培养基中含有FGF2 40‑60ng/ml和PDGF 40‑70ng/ml。3)、制备组织工程脊髓将组织工程脊髓材料饱和水溶液，滴加到含NT3、维甲酸和Neuregulin的生理盐水溶液中，静置，然后吸走培养皿中的液体，将组织工程脊髓材料经过梯度酒精脱水后，真空干燥；将扩增后的SKPs，以脑源性神经营养素(brain derived neurotrophic factor，BDNF)腺病毒表达载体感染，12h后收集细胞接种到上述的工程脊髓材料材料上，加入培养基培养。