[发明专利]中华仙影海葵溶细胞多肽CCT-I及其分离纯化方法和应用

摘要

本发明公开了中华仙影海葵溶细胞多肽CCT-I及其分离纯化方法和应用。本发明将中华仙影海葵触手粗毒经硫酸铵盐析分段沉淀后，将活性部位依次经过Sephadex G-100和superdex75两种凝胶过滤色谱柱分离纯化，最终首次从中华仙影海葵触手中分离得到一类溶细胞多肽，并通过SDS-PAGE电泳及LC-MS鉴定为一类未见报道的新型海葵溶细胞多肽，其中包含有的两个多肽（α＆β），分子量相近，均为80kDa左右，经HPLC检测，纯度较高，且两个多肽极性相近。并且测定了其半数溶细胞率约为5.75μg·mL-1，经过MTT法检测显示，CCT-I具有强烈的体外抗肿瘤活性，可用于制备治疗肿瘤药物。

主权项

中华仙影海葵溶细胞多肽CCT‑I的分离方法，其特征在于主要包括以下步骤：1）将中华仙影海葵触手粗毒液经硫酸铵分段盐析沉淀后，得到0‑40%、40%‑60%和60‑90%三个硫酸铵饱和度段，然后用pH=7.0含0.15mol·L‑1氯化钠的10mmol·L‑1PBS缓冲液复溶，待用；2）将上述60‑90%硫酸铵饱和度段沉淀复溶液经含Sephadex G‑100凝胶色谱柱，采用洗脱液以0.5mL/min流速进行分离纯化，检测波长为280nm，收集检测器上显示的各个峰的峰值管，收集的洗脱液在4℃条件下用3kDa的超滤管进行浓缩，收集峰1浓缩液待用；所述洗脱液为pH=7.0含0.15mol·L‑1氯化钠的10mmol·L‑1磷酸缓冲液；3）取上述步骤2）中峰1浓缩液经凝胶色谱柱superdex75采用洗脱液以流速0.3mL/min流速进行分离纯化，检测波长为280nm，收集检测器上显示的各个峰的峰值管，收集的洗脱液在4℃条件下用3kDa的超滤管进行浓缩，收集活性峰1浓缩液，并用3.5kDa透析袋过夜透析，透析袋外液为纯水，冷冻干燥后，得所述的溶细胞多肽CCT‑I；所述洗脱液为pH=7.0含0.15mol·L‑1氯化钠的10mmol·L‑1PBS缓冲液。