[发明专利]库蚊黄病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种库蚊黄病毒的实时荧光定量RT‑PCR检测方法及试剂盒。所述引物和TaqMan探针是根据库蚊黄病毒E基因区段的保守区域设计。试剂盒中包括的上游引物：5'‑CACGCCGAACGGACTTCT‑3’，下游引物：5’‑TCCATTGGCCGCCATATATC‑3’、TaqMan探针序列：5'‑TTTCGCACCGGAGCAGCCG‑3’，5’端标记FAM荧光报告基团、3’端标记TAMRA荧光淬灭基团，扩增的目前片段长度为62bp。该试剂盒可用于检测库蚊黄病毒，具有良好的灵敏度性和特异性，能检测到库蚊黄病毒的最低病毒滴度为10PFU/反应。

主权项

1.一种库蚊黄病毒实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含一对特异性引物与一条特异性荧光探针，引物与探针是根据库蚊黄病毒E基因区段最为保守的保守区域设计的，扩增目标的核苷酸序列为：5’‑CACGCCGAACGGACTTCTTGAGTTTCGCACCGGAGCAGCCGAGATATATGGCGGCCAATGGA‑3’，扩增目标片段长度为62bp，用以定量检测样本中库蚊黄病毒的核酸拷贝数；所述引物与探针序列分别为：引物：CxFV‑E‑F:5’‑CACGCCGAACGGACTTCT‑3’CxFV‑E‑R:5’‑TCCATTGGCCGCCATATATC‑3’探针：CxFV‑E‑Probe:FAM 5’‑TTTCgCACCggAgCAgCCg‑3’TAMRA，其中，探针5’端标记的的FAM为荧光报告基团，3’端标记的TAMRA为荧光猝灭基团。