[发明专利]猪小肠复合抗菌肽的制备方法及用途

摘要

本发明公开了一种猪小肠复合抗菌肽的制备方法及用途，本发明先采用绞肉机、胶体磨将猪小肠组织捣碎匀浆、反复冻融，初步破碎细胞。随后进行隔水煮沸热处理，再用乙酸溶液浸提即能获得较多量的抗菌肽。后离心，使杂蛋白的量大大降低，离心所得上清液依次经切向流微滤膜、切向流超滤膜过滤，调节pH值后，再经切向流纳滤膜过滤浓缩和透析除盐，调节渗透压后除菌，即得猪小肠复合抗菌肽。本发明提出的猪小肠复合抗菌肽的用途，运用抗菌肽在粘膜免疫、免疫增强剂、新型抗生素等方面的作用，将抗菌肽用于粘膜免疫起重要功能的猪传染性胃肠炎-流行性腹泻及鸡毒支原体病的防控，及替代传统抗生素，效果显著。

主权项

一种猪小肠复合抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：（1）将新鲜猪小肠用去离子水冲洗干净，去内容物、去浆膜和去脂后用注射用水彻底冲洗，然后冷冻剪碎，绞肉机初绞1‑3次，再用胶体磨匀浆，制成匀浆液；（2）将所述匀浆液反复冻融3‑6次后，100℃隔水煮沸15‑25min，然后迅速冷却后冷藏，冷藏温度为1‑4℃，冷藏时间为0‑5小时；（3）在匀浆液中加入浓度为5.00%的乙酸溶液，搅拌浸提，4℃条件进行第一次离心，将第一次离心的上清液冷冻保存，所述浓度为5.00%的乙酸溶液用注射用水配制，所述乙酸溶液与匀浆液的体积比为1:1；（4）在第一次离心的沉淀物中加入浓度为6.67%‑5.00%的乙酸溶液，搅拌浸提，4℃条件进行第二次离心，将第二次离心的上清液冷冻保存，所述浓度为6.67%‑5.00%的乙酸溶液用注射用水配制；（5）在第二次离心的沉淀物中再加入浓度为8.75%‑5.63%的乙酸溶液，搅拌浸提，4℃条件进行第三次离心，得到第三次离心的上清液，所述浓度为8.75%‑5.63%的乙酸溶液用注射用水配制；（6）合并上述三次上清液，将合并的上清液经0.1、0.22或0.45um切向流微滤膜过滤，收集微滤透过物，得到澄清液；澄清液经8或10KD切向流超滤膜过滤，收集超滤透过物，得到超滤液；调节超滤液pH值至6.5‑7.5，得到猪小肠复合抗菌肽粗制品；（7）将猪小肠复合抗菌肽粗制品经1或3KD切向流纳滤膜过滤浓缩和透析除盐，收集纳滤截留物；调节渗透压至280‑320mosm/kg，再经0.1um的除菌过滤器除菌，即得猪小肠复合抗菌肽。