[发明专利]一种利用全细胞催化制备他汀侧链中间体的方法

摘要

本发明公开了一种利用全细胞催化制备他汀侧链中间体的方法，其特征在于在反应容器中加入配制好的所述水相缓冲液，然后依次加入底物(5S/R)‑6‑X‑3‑羟基‑5‑羰基己酸叔丁酯1(X=Cl,CN 或OR)、异丙醇、重组酮还原酶的大肠杆菌全细胞，于温度25℃～40℃下搅拌反应，利用气相色谱方法（GC）检测反应进程，至反应转化率达到95%～100％时结束反应，加入乙酸乙酯多次萃取，合并有机相并蒸发脱去溶剂，即得(3R,5S/R)‑6‑X‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯2(X=Cl,CN 或 OR)。本发明反应步骤简单、成本较低、产品纯度高，可大规模生产(3R,5S/R)‑6‑X‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯2(X=Cl,CN 或 OR)的绿色生物制备方法。

主权项

一种利用全细胞催化制备他汀侧链中间体的方法，其特征在于：在反应容器中加入配制好的水相缓冲液，然后依次加入底物(5S/R)‑6‑X‑3‑羟基‑5‑羰基己酸叔丁酯、异丙醇、含有重组酮还原酶的大肠杆菌全细胞，于温度25℃～40℃下搅拌反应，利用气相色谱方法检测反应进程，至反应转化率达到95%～100％时结束反应，加入乙酸乙酯多次萃取，合并有机相并蒸发脱去溶剂，即得(3R,5S/R)‑6‑X‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯；其中X=Cl或CN；反应起始时的反应体系中，底物(5S/R)‑6‑X‑3‑羟基‑5‑羰基己酸叔丁酯的浓度为10％～30％(w/v)，含有重组酮还原酶的大肠杆菌全细胞的用量为底物质量的10％～30％(w/w)，异丙醇的浓度为3％～12％(w/v)，其中X= Cl或CN；含有重组酮还原酶的大肠杆菌全细胞的制备方法为：将含有酮还原酶基因的重组大肠杆菌单菌落接种到含卡那霉素的液体LB培养基中，于30～38℃下，摇床180‑220rpm振荡培养4～8小时，将培养得到的菌液接种到含卡那霉素的液体LB培养基中，于30～38℃下，摇床180‑220rpm振荡培养，培养至OD600值达到0.8～1.2时，加入诱导剂，于22～32℃下继续培养16～20小时，4℃下离心收集菌体，加入生理盐水清洗菌体2遍，再次离心收集菌体即得含有重组酮还原酶的大肠杆菌全细胞。