[发明专利]利用重组毕赤酵母菌降解食品中玉米赤霉烯酮的方法无效
| 申请号： | 201310356776.2 | 申请日： | 2013-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN103451115A | 公开（公告）日： | 2013-12-18 |
| 发明（设计）人： | 唐语谦;陈艺;钟凤;吴晖;肖俊梅;赖富饶;余以刚;肖性龙;李晓凤;刘冬梅 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;A23L1/015;C12R1/84 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 裘晖 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于食品处理领域，公开了一种利用重组毕赤酵母菌降解食品中玉米赤霉烯酮的方法。该方法包含如下具体步骤：（1）制备得到重组毕赤酵母菌GS115/pPIC9K-A4-Prx；将重组菌接种于BMGY培养基中，振荡培养至OD600为2～6，离心收集菌体；（2）用无菌BMMY液体培养基将菌体重悬，控制菌悬液OD600值为0.9～1.1；28～30℃，200～250r/min下每24h添加甲醇，连续诱导培养3d后，室温离心收取上清液，即得到重组过氧化物A4-Prx粗酶液；（3）将步骤（2）的粗酶液与食品样品液混合，反应后，即得到降解玉米赤霉烯酮后的食品样品液，其玉米赤霉烯酮降解率高达70%以上。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 重组 酵母菌 降解 食品 玉米 赤霉烯酮 方法 | ||
【主权项】：
一种利用重组毕赤酵母菌降解食品中玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于包括如下具体步骤：（1）通过PCR，在SEQ ID NO.1的序列的5’端添加AvrⅡ酶切位点，在3’端添加Not I酶切位点，得到带有AvrⅡ和Not I酶切位点的序列；接着通过Avr Ⅱ和Not I酶分别双酶切pPIC9K载体和前述带有AvrⅡ和Not I酶切位点的序列；然后将酶切后的载体和序列连接，得到A4‑Prx基因插入pPIC9K载体上的重组质粒pPIC9K‑A4‑Prx，将其转化到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中，得到重组毕赤酵母菌GS115/pPIC9K‑A4‑Prx；（2）将重组毕赤酵母菌GS115/pPIC9K‑A4‑Prx接种于BMGY培养基中，振荡培养至OD600为2～6，离心收集菌体；洗涤，用无菌BMMY液体培养基将菌体重悬，控制菌悬液OD600值为0.9～1.1；28～30℃，200～250r/min下每24h添加甲醇，连续诱导培养3d后，室温离心收取上清液，即得到重组过氧化物A4‑Prx粗酶液；（3）将步骤（2）的重组过氧化物A4‑Prx粗酶液与食品样品液混合，反应后，即得到降解玉米赤霉烯酮后的食品样品液。
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