[发明专利]ELISA检测融合蛋白rMBP‑NAP的方法

摘要

本发明公开了一种ELISA检测融合蛋白rMBP‑NAP的方法，包括包被、封闭、加样、加鼠MBP单抗、加酶标二抗、加入底物显色。本发明使用兔NAP多克隆抗体包被，尤其是经NAP‑GST亲和层析纯化抗体，通过使用商品化的酶标二抗的夹心间接ELISA法，避免了制备酶标抗体的麻烦，增加了灵敏度，在测定时也无需经过特殊处理，简便快捷、灵敏、特异性好。另外，在本发明的工作浓度下，还可很好地对rMBP‑NAP进行定量分析批内变异系数小于10%，批间变异系数均小于15%；加入结构类似的干扰物NAP‑GST后，OD值并没有升高，T检验证明没有发生显著差异；回收率也在85‑115%之间。

主权项

ELISA检测融合蛋白rMBP‑NAP的方法，包括以下步骤：1）包被：将100μL被包被缓冲液稀释至500ng/mL的兔抗幽门螺杆菌NAP多抗，包被至固体载体，用洗涤缓冲液洗涤；2）封闭：再加封闭液以封闭，孵育后洗涤；3）加样：分别加入100μL工作浓度的rMBP‑NAP抗原标准品和待测样品，孵育后洗涤；4）分别加入稀释至50ng/mL的小鼠MBP单抗100μL，孵育后洗涤；5）分别加入稀释至1mg/mL的、辣根过氧化物酶HRP标记的羊抗小鼠IgG抗体100μL，孵育后洗涤；6）加入底物显色，并于450nm波长处测定吸光值OD；其特征在于：所述兔抗幽门螺杆菌NAP多抗的制备方法为：以rMBP‑NAP免疫兔得到多抗血清，再经以NAP‑GST融合蛋白为配体的亲和层析纯化制得。