[发明专利]一种从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法

摘要

一种从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，包括下列步骤：A.血液分离；B.溶血破碎细胞；C.热变性；D.压滤；E.超滤浓缩；F.沉淀除杂蛋白。本发明彻底摒弃了氯仿、乙醇和丙酮等有机溶剂，根据SOD分子的结构特点及理化性质，采用热变性和金属盐沉淀的方法，简便的分离出具有较高活力的粗品SOD，这是对SOD生产的是革命性的改进。由于不使用任何有机溶剂，所以该方法成本低廉，更适合于工业化生产。本发明由于采用热变性除血红蛋白，因此可以在常温下溶血，使操作更简便，降低能耗。

主权项

一种从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于包括下列步骤：A.血液分离：取动物新鲜血液，加入质量浓度为5～13％的柠檬酸钠溶液，柠檬酸钠溶液的体积为血液体积的5～10％，经抗凝处理后经连续流离心机离心收集红细胞，泵入水解反应罐；B.溶血破碎细胞：向步骤A收集的红细胞中加入1～3倍体积的纯净水，使红细胞完全破碎，得红细胞溶血液；C.热变性：将红细胞溶血液加热至60℃保温10～30分钟后，再向红细胞溶血液中加入用以提高溶液的离子强度的碱金属盐，至碱金属盐浓度为0.1～0.6mol/L，继续加热至65℃，保温20～60分钟后，再升温至70～75℃，保温15至20分钟，立即放料冷却；D.压滤：用800目滤布对经步骤C处理的红细胞溶血液进行机械压滤，滤液为SOD粗提液；E.超滤浓缩：SOD粗提液先经超滤膜预处理拦截分子量大于100万的大分子蛋白和细胞膜碎片，然后经截留分子量8000孔径的超滤膜反复超滤，去除水分、无机盐和小分子杂蛋白，直至浓缩到SOD粗提液体积的2％～12％，即为SOD浓缩液；F.沉淀除杂蛋白：向步骤E所得的SOD浓缩液中加入金属盐，至该金属盐浓度为1～5mmol/L，搅拌均匀后静置沉淀，离心去沉淀，上清液经超滤脱盐后获得SOD粗品。