[发明专利]一种用电感耦合等离子体质谱法检测乙肝表面抗原的方法

摘要

本发明提供了一种用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法检测乙肝表面抗原（HBsAg）的方法，其通过将带有活化羧基的金属胶体颗粒共价连接乙肝病毒表面抗体（HBsAb），血清中的HBsAg与胶体颗粒标记的HBsAb通过特异性反应结合生成免疫复合物；在酸性条件下将胶体颗粒从免疫复合物中解离，再通过ICP-MS检测金属离子信号，从而间接检测HBsAg。由于每个胶体颗粒可连接一个或多个抗体分子，从而使得检测的灵敏度得到较大的提高；该方法克服了传统的胶体金免疫层析法、酶联免疫分析法等准确度低的弊端，具有优良的准确性和高灵敏度，且免疫分析检测方便、迅速，拓宽了ICP-MS在免疫分析上的应用。

主权项

一种用电感耦合等离子体质谱法检测乙肝表面抗原的方法，其特征在于，包括下述步骤：1）制备带有活化羧基官能团的金属胶体溶液：用浓度为0.01 mol/L、pH 值为7.2―7.6的磷酸盐缓冲液分别溶解1‑乙基‑3‑(3‑二甲氨丙基)碳二亚胺和N‑羟基琥珀酰亚胺，配制成浓度均为20 mg/mL的溶液，然后将其与金属胶体溶液按摩尔比nEDC：n NHS：n金属胶体＝5：7.5：1混和，于4℃振荡后离心分离，弃去上清液，得到活化后的金属胶体溶液；2）胶体溶液标记HBsAb：将步骤1）所得活化后的金属胶体溶液的pH调至6.2，加入HBsAb于4℃恒温震荡1h，再加入牛血清蛋白使其终浓度为1％；然后于4℃、2000转/分离心30min，取上清夜50000转/分4℃离心60 min，取沉淀用含1％牛血清蛋白的磷酸盐缓冲液溶解，重复离心2次，将沉淀悬浮于磷酸盐缓冲液中，再加入叠氮化钠、牛血清蛋白使其终浓度分别为0.04％和1％，所得溶液即为纳米金属颗粒标记的抗体溶液，于4℃放置备用；3）构建免疫过程：将含不同浓度HBsAg的碳酸盐缓冲溶液加入到各聚乙烯板的孔中，4℃放置12h；用洗涤缓冲液洗涤聚乙烯板的各孔；然后每孔加入含1％牛血清蛋白的磷酸盐缓冲液，37℃温育反应1 h；再加入步骤2）所得纳米金属颗粒标记的抗体溶液于37℃反应2 h；最后用洗涤缓冲液洗涤聚乙烯板的各孔；4）金属离子信号检测：在聚乙烯板的各孔中加入2％的硝酸溶液，超声15 min，然后用蠕动泵将样品带入ICP‑MS，测定金属离子信号；5）根据金属离子在ICP‑MS中的强度与HBsAg的浓度呈线性关系，绘制工作曲线。