[发明专利]一种高效提取绿豆α-淀粉酶抑制剂的方法

摘要

本发明公开了一种高效提取绿豆α‑淀粉酶抑制剂的方法，所述方法是采用凝胶柱层析和乙醇沉淀从绿豆中提取并纯化出组分均一的α‑淀粉酶抑制剂，同时就绿豆α‑淀粉酶抑制剂提取条件对猪胰α‑淀粉酶抑制活性的影响做了分析，确定了绿豆α‑淀粉酶抑制剂的最佳提取工艺条件。按照本发明方法提取的绿豆α‑淀粉酶抑制剂对温度具有较高的稳定性，因此在开发为一种安全、天然的降糖药物中有广阔的应用前景。

主权项

1.一种制备绿豆α‑淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：a) 将脱脂绿豆粉在 35～50℃温度范围浸泡 4～20 小时，然后粉碎制成 100 目以下的细粉；经搅拌，12000g，4℃离心 30min 去渣；b) 用凝胶柱 SephedexG‑75 提取，即先以 HAc‑NaAc 缓冲液平衡凝胶柱，再将步骤 a) 离心后取得的上清液加入 HAc‑NaAc 缓冲液至终浓度为 0.02mol/L，以 0.5mL/min 流速上样，再以 HAc‑NaAc 缓冲液洗脱提取，收集蛋白峰并逐管测定淀粉酶抑制剂活性，收集活性峰洗脱液，与预先放置于‑20℃的乙醇，按照 1 ∶ 1 ～ 1 ∶ 3 体积比混合，‑20℃沉淀，提取时间即第一次 SephedexG‑75 提取收集活性峰洗脱液与乙醇沉淀 ‑20℃放置的时间，范围为 1～2h；HAc‑NaAc 缓冲液浓度为 0.02mol/L，pH 为 4.0；c)12000g，室温离心 20min，去除上清液，清洗并减压干燥后制得α‑AI 粗提品；d) 将α‑AI 粗提品溶于适量的 HAc‑NaAc 缓冲液中，再使用 Sephedex G‑75 凝胶柱，先利用 HAc‑NaAc 缓冲液平衡凝胶柱，再将溶有α‑AI 粗提品的 HAc‑NaAc 缓冲液上样，流速为0.5mL/min，以 HAc‑NaAc 缓冲液洗脱，流速为 0.5mL/min，得到一蛋白主峰，逐管检测淀粉酶抑制活性，进而收集活性峰，经透析、浓缩后减压干燥，获得α‑AI；HAc‑NaAc 缓冲液浓度为 0.02mol/L，pH 为 4.0。