[发明专利]一种从柚类果实中分离纯化柠檬苦素类化合物的方法

摘要

本发明提供一种分离纯化柠檬苦素类化合物的方法，通过样品提取与HZ-816树脂初步纯化、高速逆流色谱纯化、半制备液相色谱分离三个步骤完成。本发明采用溶剂提取与HZ-816树脂初步去杂，高速逆流色谱和半制备液相色谱联用的纯化分离技术，以柚类果实的囊衣为原料，操作简单，生产周期短，样品用量少，条件稳定容易控制，最终纯化得到三种柠檬苦素类化合物，三种化合物的纯度均在95%以上。本发明方法适用于工业化生产和科学研究。

主权项

一种从柚类果实中分离纯化柠檬苦素类化合物的方法，其特征在于，通过以下步骤实现： （1）样品提取与大孔树脂去杂：取冷冻干燥的柚囊衣粉末用料液重量比1:20的80%丙酮超声提取三次，提取温度40℃，4000 rpm离心20 min，合并上清液，在旋转蒸发仪上蒸干得浸膏，溶于50%乙醇中，取400 mL上HZ‑816大孔树脂，柱床体积为30 mL,上样流速1 mL/min，上样后的大孔树脂先用水冲洗4倍柱床体积以去掉杂质，然后用75%乙醇400mL洗脱，洗脱流速为0.9 mL/min，收集洗脱液，在旋转蒸发仪上50℃蒸干得大孔树脂除杂后的粗提物粉末；（2）高速逆流色谱分离纯化：配制正己烷‑正丁醇‑甲醇‑水的溶剂体系，充分摇匀过夜，上相为固定相，下相为流动相，固定相首先以20 mL/min流速泵入高速逆流色谱，稳定后，开启逆流色谱仪将转速调至1000 rpm，同时流动相以2 mL/min的速度通过高速逆流色谱，待流出液分层后将大孔树脂粗提物粉末20mg溶于1mL上相与4mL下相的混合液中进样，根据色谱仪检测器采集的图谱将不同的峰开始与结束之间的流出液分别收集，分为组份Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ；（3）半制备液相色谱分离制备：配制乙腈‑甲醇‑水的溶剂体系，以8mL/min流速泵入半制备液相色谱，基线稳定后，将所收集组份Ⅲ蒸干所得粉末溶于流动相中，进样，进样体积不超过2mL, 根据色谱检测器采集的图谱将22‑25min和30‑40min之间的流出液分别收集，每管收集2 mL，用HPLC测定各管组分的纯度，分别合并含有单一柠檬苦素、诺米林和异黄柏酮酸的各管，在旋转蒸发仪上50℃条件下浓缩蒸干即得到柠檬苦素、诺米林和异黄柏酮酸。