[发明专利]脂肪间充质干细胞在制备肝癌化疗增敏制剂中的应用

摘要

本发明属于干细胞与生物技术领域，涉及脂肪间充质干细胞的新应用。首先本发明提供了一种构建携带miR-122的脂肪来源的间充质干细胞的方法。另外，本发明了还公开了携带miR-122的脂肪来源的间充质干细胞用途。携带miR-122的脂肪来源的间充质干细胞在制备肝癌化疗增敏制剂的应用。利用本发明所述的携带miR-122的AMSC制备化疗增敏剂，并与临床常规化疗药物联合应用于肝癌荷瘤小鼠模型的化疗，可显著提高异位或原位肿瘤组织对化疗药物的敏感性，而增强化疗效果，阻滞肝癌进展。并可降低化疗药物的使用剂量，减轻化疗副反应。本发明为制备新型的肝癌化疗靶向增敏剂提供了技术支持，并为肝癌的系统化疗提供了新方法。

主权项

携带miR‑122的脂肪来源的间充质干细胞的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：1）脂肪来源的间充质干细胞的制备：脂肪组织经DPBS清洗后，用Ⅰ型胶原酶37℃消化1小时，然后室温离心后弃去上层油脂和液体，细胞沉淀以DPBS重悬洗涤2遍后离心收集细胞，接种在含5%胎牛血清的低糖DMEM培养基的培养瓶内，细胞贴壁增殖接近80%融合时，进行消化、传代，依此法传代2‑4次，达到纯化和扩增间充质干细胞的目的，收集细胞冻存、复苏备用；2）携带miR‑122的脂肪来源的间充质干细胞的制备：miR‑122表达质粒通过电转法导入AMSC，以EGFP指示转染效率，以转染无关miRNA的表达质粒作为对照，以表达质粒所带的Blasticidine抗性基因进行筛选,筛选4‑6周后可获得稳定表达miR‑122的携带miR‑122的脂肪来源的间充质干细胞。