[发明专利]碳纳米粒子修饰电极电化学发光测定博来霉素的方法

摘要

一种博来霉素（BLMs）含量的检测方法，属于电化学发光和传感器技术领域。利用电化学发光试剂标记DNA制备DNA探针（Ru-DNA），将羧基化的碳纳米粒子修饰电极，通过静电斥力和π-π堆积作用之间的竞争作用，利用DNA与碳纳米粒子非共价键自组装原理构建了碳纳米粒子修饰电极电化学发光生物传感器。将目标物博来霉素与DNA探针作用，导致DNA被切割，吸附在碳纳米粒子修饰电极上DNA探针减少，产生的弱的电化学发光信号，以此实现对博来霉素的测定。这种方法有着简单、快速的优势。

主权项

碳纳米粒子修饰电极电化学发光测定博来霉素的方法，其特征包括以下步骤：a 将0.1~1.0 g聚乙烯醇溶解在10 ml水中制得均相溶液，然后放入微波炉（600 W）加热15 min（分钟）至溶液颜色改变，将上述溶液以13000 rpm离心30 min去除杂质，得碳纳米粒子；将0.1~2.0克碳纳米粒子与0.5 mL 63%的硝酸和0.5 mL二甲基甲酰胺混合后在100摄氏度下反应8小时（h）；b 将200 µL 2 OD DNA加入200 µL 1.0×10‑3 mol/L Ru(bpy)2(dcbpy)NHS（二(2,2'‑联吡啶) (2,2'‑吡啶‑4,4'‑二碳酸)琥珀酰胺钌），室温下振荡6~18 h，随后，在该溶液中加入100 µL 3 mol/L 醋酸钠和2.0 mL 冷无水乙醇，溶液在‑16 ℃冷却24 h，然后在12000转速和‑4 ℃下离心30 min，沉淀物用1 mL冷乙醇清洗三次，除去未反应的Ru(bpy)2(dcbpy)NHS，得Ru(bpy)2(dcbpy)NHS标记的DNA探针（电化学发光探针）用1.0 mL 0.10 mol/L 磷酸缓冲溶液溶解；c 金电极经1.0 μm，0.3 μm，0.05 μm的α‑A12O3抛光粉抛光后，用二次蒸馏水冲洗干净，并在超声波水浴中超声5 min，用高纯氮气吹干，备用；将处理好的金电极浸入100 μL（10‑4 M）的巯基乙胺中，固定2~8 h（37℃）后，用磷酸缓冲溶液冲洗二次，取1 mL羧基化碳纳米粒子溶液，加入N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）3.6 mg、1‑（3‑二甲氨基醛）‑3‑乙基二亚胺盐酸盐（EDC）7.2 mg，在37 °C下活化1 h，再将上述电极浸入其中，反应过夜，制得碳纳米粒子修饰电极，利用DNA与探针与碳纳米粒子修饰电极之间的静电斥力和π‑π堆积作用之间的竞争作用，得碳纳米粒子修饰电极电化学发光生物传感器。