[发明专利]SV40LT重组构建染色体缺失猫叫综合征细胞模型及其细胞库在审
| 申请号： | 201310403967.X | 申请日： | 2013-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN104419668A | 公开（公告）日： | 2015-03-18 |
| 发明（设计）人： | 翁炳焕;黄荷凤;徐晨明;应丽亚;李晓;尤建飞 | 申请（专利权）人： | 翁炳焕 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C40B50/06;C40B40/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 317300 浙江省仙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及用于医学领域的SV40LT抗原基因介导染色体缺失猫叫综合征细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(-)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入经胶原酶II消化的离体传代或呈对数生长的染色体缺失猫叫综合征细胞，使重组子与细胞的DNA整合，并扩大培养经G418筛选含阳性重组子的细胞克隆，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、软琼脂集落生长、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为SV40LT介导染色体缺失猫叫综合征体外研究细胞模型冻存于液氮中，为在体外从细胞水平长期研究其发病机制奠定基础。 | ||
| 搜索关键词： | sv40lt 重组 构建 染色体 缺失 猫叫 综合征 细胞 模型 及其 | ||
【主权项】：
一种用于医学研究领域的SV40LT重组构建染色体缺失猫叫综合征细胞模型及其细胞库，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(‑)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag‑pcDNA3.1(‑)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入经胶原酶II消化的离体传代或呈对数生长的染色体缺失猫叫综合征组织细胞，使重组子与细胞的DNA整合，并扩大培养经G418筛选含阳性重组子的细胞克隆，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、软琼脂集落生长、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为SV40LT抗原基因介导染色体缺失猫叫综合征体外研究细胞模型冻存于液氮中，为在体外从细胞水平(替代人体或动物直接试验)长期研究染色体缺失猫叫综合征的发病机制奠定基础。
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