[发明专利]SV40基因重组构建巨核细胞模型及其细胞库在审
| 申请号： | 201310404046.5 | 申请日： | 2013-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN104419670A | 公开（公告）日： | 2015-03-18 |
| 发明（设计）人： | 翁炳焕;黄荷凤;蔡志坚;潘玲;李晓;陈雁 | 申请（专利权）人： | 翁炳焕 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;C40B50/06;C40B40/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 317300 浙江省仙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及用于医学研究领域的SV40LT基因介导巨核细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(-)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入体外培养的巨核细胞，使重组子与细胞的DNA整合，以G418筛选的含阳性重组子的细胞，作传代、扩大培养，筛选细胞形态、细胞生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞生物学特性者作为巨核细胞模型冻存于液氮中，以此构建SV40LT基因介导巨核细胞模型及其细胞库，以建立在体外长期传代培养巨核细胞的方法并用于体外研究巨核细胞发育、功能和病理机制。 | ||
| 搜索关键词： | sv40 基因 重组 构建 巨核细胞 模型 及其 细胞 | ||
【主权项】：
一种用于医学研究领域的SV40基因重组构建巨核细胞模型及其细胞库，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(‑)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag‑pcDNA3.1(‑)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入体外培养的巨核细胞，使重组子与细胞的DNA整合，以G418筛选的含阳性重组子的细胞，作传代、扩大培养，筛选细胞形态、细胞生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞生物学特性者作为巨核细胞模型冻存于液氮中，以此构建SV40LT基因介导巨核细胞模型及其细胞库，以建立在体外长期传代培养巨核细胞的方法并用于体外(替代人体或动物直接试验)研究巨核细胞发育、功能和病理机制。
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