[发明专利]导入hTERT和SV40LT重组子构建爱德华综合征细胞模型及其细胞库

摘要

本发明涉及医学领域的导入hTERT和SV40LT重组子构建爱德华综合征细胞模型及其细胞库，其主要特征是以T4DNA连接经BamHI酶切质粒SV40LTag DNA及载体pcDNA3.1(-)DNA的产物，构建SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组子；并以Ligation Mix连接经EcoR I和Xho I双酶切质粒pCIneo-hTERT和载体pLXSNneo的产物，构建pLXSNneo-hTERT重组子，两重组子经感受态细胞扩增纯化和鉴定后以脂质体转染入爱德华综合征细胞，经G418筛选含阳性重组子的细胞克隆并扩大培养，筛选符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为SV40LT和hTERT重组子介导爱德华综合征体外研究细胞模型，为从细胞水平在体外长期研究其发病机制奠定基础。

主权项

一种用于生殖健康研究领域的导入hTERT和SV40LT重组子构建爱德华综合征细胞模型及其细胞库的方法，其主要特征是以T4DNA连接经BamHI酶切质粒SV40LTag DNA及载体pcDNA3.1(‑)DNA的产物，构建SV40LT‑pcDNA3.1(‑)重组子；并以Ligation Mix连接经EcoR I和Xho I双酶切质粒pCIneo‑hTERT和载体pLXSNneo的产物，构建pLXSNneo‑hTERT重组子，两重组子经感受态细胞扩增纯化和鉴定后以脂质体转染导入爱德华综合症组织细胞，经G418筛选含阳性重组子的细胞克隆并扩大培养，筛选细胞形态、生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞端粒酶活性、hTERT mRNA表达产物、免疫组织化学染色、细胞增殖周期及细胞凋亡率符合永生化细胞特性并与原代细胞相同或相近者作为SV40LT和hTERT重组子介导爱德华综合症体外研究细胞模型冻存于液氮中，为从细胞水平(替代人体或动物直接试验)在体外长期研究其发病机制奠定基础。