[发明专利]用于无抗生素ColE1 质粒增殖的宿主-载体系统

摘要

本发明涉及用于无抗生素ColE1质粒增殖的宿主‑载体系统。宿主‑载体系统，利用ColE1‑型质粒的基于RNA‑拷贝数控制机制用于调节标志物基因的表达，容许进行质粒的无抗生素筛选并且可以用于产生质粒DNA和重组蛋白。

主权项

1.一种非天然存在的细菌细胞，包含i)编码表达可被调节的标志物蛋白的DNA序列，并且所述的DNA序列可操作地连接至下述序列，ii)编码部分RNA II序列的DNA序列，并且所述的RNA II序列a)互补于可从带有ColE1复制起点的质粒转录的RNA I序列，b)只包含两个环，且c)与位于所述部分RNA II序列的上游或下游的核糖体结合位点一起存在于编码所述标志物蛋白的标志物基因的上游，其中所述部分RNA II序列进行设计以及放置以使其保证互补序列之间的足够的RNA-RNA相互作用，从而当存在质粒的时候，从其转录的RNA I结合至宿主mRNA，结合程度足以抑制从DNA序列i)转录的mRNA的翻译，其中RNA I为10-555nt，且其中启动子和/或操纵子位于RNA II的上游。