[发明专利]人工诱导石斑鱼雌核发育鱼苗的方法

摘要

本发明公开了一种人工诱导石斑鱼雌核发育鱼苗的方法，以遗传灭活的异源精子为刺激源，刺激斜带石斑鱼成熟卵子，激活后使用冷水休克实现二倍化，制备过程中使用倍性分析技术对获得的胚胎或幼苗进行检测，实现质量控制。通过本发明的方法，能够制备得到减数分裂抑制型的雌核发育石斑鱼。

主权项

一种人工诱导石斑鱼雌核发育鱼苗的方法，该方法包括如下步骤：(1)雄鱼的选择和精子的采集：选择体格健壮体表无伤的鞍带石斑鱼雄性成鱼为亲本(5‑7龄)，体重60‑80kg／尾，置于海上网箱或陆地池塘进行培育，投喂冰鲜杂鱼和鱿鱼进行培育；待海水温度稳定在28‑32℃时，根据斜带石斑鱼排卵规律，提前1‑2日给鞍带石斑鱼雄鱼注射HCG(200U／kg)，20‑28小时后将雄鱼置于封闭网箱中，采用麻醉剂将其麻醉后捞出水面置于帆布担架内挤精，采集的鞍带石斑鱼鲜精，使用精子稀释液按照1：8‑10比例稀释，0‑4℃冷藏保存；(2)精子遗传物质灭活取稀释过的鞍带石斑鱼精液平铺在预冷的培养皿中，精子液面厚度控制在0.1‑0.15mm，置于紫外灯箱中照射，照射过程中遮蔽自然光并置于摇床中进行，保持不停的摇动以确保精子照射均匀，紫外光照射剂量为40‑60mJ／cm2；(3)人工授精的方法鞍带石斑鱼紫外照射处理完成后，收集精子置于冰上避光保存；将待产斜带石斑鱼雌鱼捞出，擦干体表水分，将成熟卵子挤入干燥刻度烧杯中；按照毫升处理精子授精40‑60毫升卵子的比例进行精卵人工混合，混合45‑90秒后加入洁净自然海水完成人工授精；(4)冷休克诱导石斑鱼卵子提前准备预冷的海水及冰箱，人工授精后4‑8分钟，用小手操网将卵子捞出，按照每50ml卵子使用2000‑4000ml预冷的2‑6℃海水的比例立即转入预冷的海水中，低温休克处理时间为15‑25分钟，经孵化桶孵化得人工培育石斑鱼育苗。