[发明专利]表达9家族糖苷水解酶基因CtAA9b的毕赤酵母工程菌株

摘要

本发明是一种表达嗜热毛壳菌Chaetomium thermophilum热稳定热稳定9家族糖苷水解酶基因CtAA9b的毕赤酵母工程菌Pichia pastoris GS-CT-9B。通过RT-PCR方法从嗜热毛壳菌Chaetomium thermophilum获得糖苷水解酶基因CtAA9b，将其克隆并插入到毕赤酵母整合表达载体pPIC9K中，然后将得到的糖苷水解酶基因CtAA9b表达载体pPIC9K/CtAA9b导入到毕赤酵母GS115中，再从中筛选出一种表达糖苷水解酶基因CtAA9b的酵母工程菌GS-CT-9B。该工程菌表达的糖苷水解酶CtAA9B对内切纤维素酶的活性具有明显的促进作用，混合酶比原始内切酶N24的降解纤维素的活性提高1.7倍。在Mn2+条件下，CtAA9B和CtAA9B+N24的纤维素酶活性可分别提高15倍和2.54倍。CtAA9B具有良好的热稳定性和提高纤维素酶活力的能力，可广泛用于纤维废料及其它工业领域，具有重大经济价值和社会价值。

主权项

一种表达嗜热毛壳菌Chaetomium thermophilum9家族糖苷水解酶基因CtAA9b的酵母工程菌株，其特征在于该菌为一种毕赤酵母，通过RT‑PCR方法从嗜热毛壳菌Chaetomium thermophilum获得热稳定9家族糖苷水解酶基因CtAA9b,将该基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,获得表达重组质粒pPIC9K/CtAA9b,转化毕赤酵母GS115,从中筛选出表达热稳定糖苷水解酶基因CtAA9b的毕赤酵母工程菌株GS‑CT‑9B，该糖苷水解酶CtAA9B对内切纤维素酶的活性具有明显的促进作用。