[发明专利]一种区分鉴定大白菜、结球甘蓝FLCs基因的方法

摘要

本发明公开了一种区分鉴定大白菜、结球甘蓝FLCs基因的方法。该方法包括（1）根据已公布的拟南芥、白菜和甘蓝FLCs基因序列，对白菜和甘蓝FLCs基因外显子4和外显子7区段设计引物，合成引物序列；（2）提取不同基因型大白菜和结球甘蓝的基因组DNA，以其为模板进行上述引物的PCR扩增；（3）扩增产物在1.8％琼脂糖凝胶中电泳分离检测；（4）筛选能够区分大白菜、结球甘蓝FLCs基因的引物；（5）利用FLCs基因的特异引物鉴定大白菜—结球甘蓝异源三倍体杂交种FLCs基因组成。本发明实现了对大白菜、结球甘蓝8个FLCs同源基因的全面、有效鉴定，为进一步研究不同FLCs基因对抽薹开花等的作用提供技术支撑。

主权项

一种区分鉴定大白菜、结球甘蓝FLCs基因的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）根据已公布的拟南芥、白菜和甘蓝FLCs基因序列，对白菜和甘蓝FLCs基因外显子4和外显子7区段设计引物，合成引物序列；（2）提取不同基因型大白菜、结球甘蓝基因组DNA，以其为模板进行上述引物的PCR扩增；（3）扩增产物在1.8％琼脂糖凝胶中电泳分离检测；（4）筛选能够区分大白菜、结球甘蓝FLCs基因的引物，其筛选标准如下：在大白菜和结球甘蓝中分别扩增出与目的基因片段大小一致的扩增产物，且该产物大小在大白菜和结球甘蓝中不同；将符合标准引物的扩增产物回收测序，与已公布的FLC基因比对，验证扩增产物为相应的目的基因片段；其中步骤（4）筛选到的用于区分大白菜、结球甘蓝FLC1的引物序列为5'‑ CTTGAGGAATCAAATGTCGATAA‑3'与5'‑TAATTAAGYAGYGGGAGAGTYAC‑3'，用于区分大白菜、结球甘蓝FLC2的引物序列为5'‑TAAGCTTGTGGAATCAAATTCTG‑3'与5'‑ATTTTATCAGCTTCGGCTC‑3'，用于区分大白菜、结球甘蓝FLC3的引物序列为5'‑GTGGAATCAAATGTCGGTGGT‑3'与5'‑ TAATTAAGYAGYGGGAGAGTYAC‑3'，用于区分大白菜、结球甘蓝FLC5的引物序列为5'‑ AATTGTCGATGTAAGCGTGG‑3'与5'‑TAATTAAGYAGYGGGAGAGTYAC‑3'。