[发明专利]一种检测雌酚的电化学免疫检测方法

摘要

本发明公开了一种能检测雌酚，包括三种人工合成的具有类似雌性激素作用的化合物，即己烯雌酚、己烷雌酚和双酚A的电化学免疫检测方法。所述的检测方法为：首先制备纳米金沉积并采用石墨烯/雌酚/壳聚糖复合物修饰的电化学传感器，然后以K3[Fe(CN)6]为探针，基于己烯雌酚抗体对己烯雌酚、己烷雌酚和双酚A的交叉免疫反应，实现对这三种雌酚的检测。本发明提供的方法检测己烯雌酚的检测限为0.1ng/mL，线性范围为1~2500ng/mL；检测己烷雌酚的检测限为0.3ng/mL，线性范围为1~3000ng/mL；检测双酚A的检测限为0.2ng/mL，线性范围为1~3000ng/mL。

主权项

一种检测雌酚的电化学免疫检测方法，包括以下步骤：1）电化学免疫传感器的制备：首先在经过打磨、抛光和清洗的玻碳电极表面沉积金纳米粒子；然后将石墨烯/雌酚/壳聚糖混合液滴涂于纳米金沉积的玻碳电极表面，制得所述的电化学免疫传感器；2）标准溶液的配制：配制一组包括空白标样在内的含有不同已知浓度的待测雌酚、pH为7.4的磷酸缓冲溶液为标准溶液，且其中含有相同浓度的己烯雌酚抗体；3）工作曲线的建立：将所述免疫传感器分别浸入雌酚标准溶液中孵育，孵育后用磷酸缓冲溶液冲洗免疫传感器，在K3[Fe(CN)6]溶液中进行差分脉冲伏安（DPV）扫描，记录响应电流；空白标样的响应电流为I0，含有待测雌酚的标样的响应电流为Ix，响应电流的增加值ΔI等于Ix与I0的差值；将所述ΔI与标准溶液中雌酚的浓度C绘制成ΔI‑C工作曲线，采用线性回归法得到ΔI‑C线性回归方程；4）雌酚的测定：将待测样品配制为含有与步骤2）相同浓度的己烯雌酚抗体的磷酸缓冲溶液，按照与步骤3）相同的方法对所述免疫传感器进行孵育和差分脉冲伏安扫描，记录响应电流；根据响应电流的增加值ΔI和ΔI‑C线性回归方程，得到雌酚的含量。